中药单体榄香烯体外对人晶状体上皮细胞内胶原蛋白合成的影响

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1、中药单体榄香烯体外对人晶状体上皮细胞内胶原蛋白合成的影响目的：探讨中药单体榄香烯（effectsofelemene,Ele）对人晶状体上皮细胞系（humanlensepithelialcellsB3,HLEB3）内Ⅰ型胶原蛋白和Ⅲ型胶原蛋白合成的影响。方法：利用10μg/L碱性成纤维细胞生长因子(recombinanthumanbasicfibroblastgrowthfactor,rhbFGF)诱导HLEB3增殖，将80mg/L的Ele作用在处于增殖状态下的HLEB3，24h后采用双抗体夹心ABC酶联免疫吸附测定法

2、（enzymelinkedimmunosorbentassay,ELISA）检测Ele作用后HLEB3内Ⅰ型胶原蛋白和Ⅲ型胶原蛋白表达。结果：rhbFGF作用后HLEB3内Ⅰ型胶原蛋白浓度为53.5±5.4μg/L，较正常组（38.5±2.3μg/L）明显升高，Ele作用后HLEB3内Ⅰ型胶原蛋白的浓度为29.5±2.9μg/L，较rhbFGF组明显下降(P<0.01)。rhbFGF作用后HLEB3内Ⅲ型胶原蛋白浓度为1.27±0.29μg/L，较正常组（0.83±0.12μg/L）明显升高，Ele作用后HLEB

3、3内Ⅲ型胶原蛋白的浓度为0.69±0.11μg/L，较rhbFGF组明显下降(P<0.01)。结论：Ele抑制rhbFGF诱导的HLEB3增殖的同时也能抑制HLEB3内Ⅰ，Ⅲ型胶原蛋白合成，干扰HLEB3纤维化，可望成为防治后囊膜混浊的理想药物。【关键词】 榄香烯晶状体上皮细胞后囊膜混浊Ⅰ型胶原蛋白Ⅲ型胶原蛋白0引言   胶原蛋白（collagen）或称胶原，是动物细胞合成的一种生物性高分子，是一类最主要的细胞外基质(extracellularmatrix，ECM)。目前的研究表明，ECM与后囊膜混浊的关系密切：ECM

4、是构成纤维化性混浊的重要成分。免疫电镜检查显示混浊的晶状体后囊膜的纤维有Ⅰ，Ⅲ和IV型胶原；此外ECM还可调节细胞生长分化及细胞运动。榄香烯（elemene，Ele）是天然药物莪术的主要成分，具有抗血栓形成、抑制肿瘤细胞增殖、诱导肿瘤细胞凋亡[1,2]，我们的研究发现Ele能抑制由重组人碱性成纤维细胞生长因子（recombinanthumanbasicfibroblastgrowthfactor,rhbFGF）诱导的人晶状体上皮细胞系（humanlensepithelialcellsB3,HLEB3）增殖（另文报道），我们

5、进一步采用双抗体夹心ABC酶联免疫吸附测定法（enzymelinkedimmunosorbentassay，ELISA)检测Ele作用后HLEB3内Ⅰ型胶原蛋白(collagenI)和Ⅲ型胶原蛋白(collagenIII)表达，探讨Ele是否在抑制HLEB3增殖的同时还能抑制HLEB3内Ⅰ和Ⅲ型胶原蛋白的合成，从而对阻止晶状体上皮细胞纤维化起重要的作用。1材料和方法1.1材料 人晶状体上皮细胞系HLEB3由广州中山大学眼科研究中心提供；Ele乳液，纯度99.0%，大连金港制药有限公司；rhbFGF为英国PeproT

6、ech公司；DMEM培养基、胰蛋白酶和EDTA分别是美国Gibco公司、美国Amresco公司和美国Augus公司；Ⅰ型胶原蛋白(collagenI)和Ⅲ型胶原蛋白(collagenIII)的ELISA试剂盒由上海西唐生物科技有限公司提供。自动酶标读数仪：美国BioTekELX808；倒置研究显微镜：日本IMT413；二氧化碳培养箱：美国FORMA2111。取出保存冻存细胞的冻存管立即放入37℃水中，将溶解的细胞悬液用10倍体积以上的培养液进行稀释，离心，除上清，反复洗涤3次。以5×108个/L接种于培养瓶中，37℃，50

7、mL/LCO2培养箱培养。待细胞生长融合后进行传代培养。1.2方法 80mg/LEle作用24h后收集细胞上清液；取出已经包被了抗人Ⅰ，Ⅲ型胶原蛋白单克隆抗体的96微孔板。设标准孔8孔，每孔各加入标准稀释液100mL，第1孔加标准品100μL，均匀后用加样器吸出100μL，移至第2孔。如此反复作对倍稀释至第7孔，最后从第7孔中吸出100μL弃去，使之体积均为100μL，第8孔为空白组。待测品孔每孔各加入细胞上清液100μL，每组6个孔；将反应板充分混匀后置37℃，120min；用洗涤液将反应板充分洗涤5次，在滤纸上印干；每孔

8、加第一抗体工作液50μL，置37℃，60min；同前洗板后每孔加酶标抗体工作液100μL，置37℃，60min；同前洗板后每孔加底物工作液100μL，置37℃暗处反应10min；每孔加50μL终止液混匀。在492nm处测吸光度值；根据标准品A值画出标准曲线，根据样品A值在该曲线图上查出相应