榄香烯对人宫颈癌细胞hela的体外抑瘤效应

《榄香烯对人宫颈癌细胞hela的体外抑瘤效应》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、榄香烯对人宫颈癌细胞Hela的体外抑瘤效应　　【关键词】榄香烯；凋亡；Hela细胞；Bcl2蛋白　　【Abstract】ObjectiveTostudycylostaticactionandthemechanismofelemeneonhumancervixcancerHelacells.MethodsHelacellseneatdifferentconcentrations.Thegroetryandagarosegelelectrophoresis.ResultsElemeneremarkablyinhibi

2、tedthegroenecouldinduceapoptosisandregulateexpressionofBcl2proteininHelacells.ConclusionElemenecaninhibithumancervixcancerHelacells,entofBcl2proteinexpression.　　【Keyene，apoptosis，Helacells，Bcl2protein　　榄香烯（elemene）属于不含氧的倍半烯烃类，系由中药温莪术挥发油中分离出来的油状物单体，属国家二类抗癌新药［1

3、］。其疗效好，对肝肾脑等重要器官无毒副作用［2，3］，具有广泛的应用前景。本文以人宫颈癌细胞株Hela为模型来探讨榄香烯对其的作用机制，以便对肿瘤治疗提供参考。　　1材料和方法　　1.1材料人宫颈癌细胞株Hela购自中科院上海细胞所细胞库。榄香烯，大连金港制药有限公司产品；MTT、DMSO均为Sigma公司产品；RPMI1640为Gibco公司产品。　　1.2细胞培养将人宫颈癌细胞株Hela以含10%胎牛血清的RPMI1640（含青霉素100U/ml，链霉素100μg/ml）在37℃，5%CO2孵育箱中培养，取对

4、数生长期的细胞进行实验。　　1.3细胞增殖抑制试验取对数生长期的Hela细胞接种于96孔培养板（细胞数为5×104/孔，100μl/孔），加入不同浓度的榄香烯，使其终浓度分别为0，25，50，100，200，400μg/ml，最后用培养基补充至每孔200μl，5%CO2孵箱中培养72h后每孔加入MTT溶液（5g/L）20μl，继续培养4h后，1000r/min，弃去孔内培养基，每孔加入150μlDMSO，37℃温摇10min，使其充分溶解，酶联检测仪570nm波长处测定吸收度A值。抑制率（%）=［（A对照-A实验

5、）/（A对照-A空白）］×100，并求其IC50值。　　1.4流式细胞仪检测细胞周期变化收集200μg/ml榄香烯作用不同时间的细胞，用PBS离心洗涤两次，弃上清，加入70%乙醇10　ml，上机前离心洗涤制成单细胞悬液，加PI染色，暗室放置，用流式细胞仪检测细胞凋亡情况。　　1.5凝胶电泳检测凋亡梯度收集不同浓度榄香烯作用72h的细胞，1000r/min离心5min，弃上清，001mol/L　PBS洗1次。1000r/min离心5min，弃上清，用2ml　TE溶解细胞沉淀，加10%SDS200　μl，混匀后再加入

6、1%蛋白酶K　20　μl，37℃过夜。次日用酚氯仿抽提基因组DNA，行1%琼脂糖凝胶电泳，50　V电泳3　h，紫外灯下照相。　　1.6Bcl2蛋白水平检测收集不同浓度榄香烯作用48　h的Hela细胞，PBS离心洗涤2次，甲醛固定，再用PBS配制的Staing缓冲液（2%AB人血清，01%NaN3）洗涤，离心，弃上清，置-20℃冷冻过夜，在冷冻的细胞内加入PBS配制的TB穿透液，加入Bcl2多抗（兔抗人）工作液40μl，4℃30min，PBS洗掉Bcl2多抗，流式细胞仪检测。　　1.7统计学处理样本均数的比较采用D

7、unt检验。　　2结果　　2.1榄香烯对细胞增殖的抑制作用榄香烯25~400μg/ml作用72h对Hela细胞体外增殖有显著的抑制作用，呈剂量依赖性（表1），求其IC50值为2135μg/ml，1346μg/ml。　　表1榄香烯对Hela细胞增殖抑制作用（略）　　2.2流式细胞术分析榄香烯对细胞周期的影响200μg/ml榄香烯作用于Hela细胞，当作用6h后，G1期细胞稍下降，S期细胞逐渐增多；作用12h后，S期细胞发生阻滞；作用24h后，亚G1期细胞显著增多（表2），出现明显的亚二倍体峰。上述结果表明，榄香烯对

8、Hela细胞周期有着明显影响，主要是阻滞细胞周期中S期向G2/M期的转变过程，减少有丝分裂，并引起细胞凋亡。　　表2榄香烯对Hela细胞周期的影响（略）　　2.3Bcl2蛋白水平检测随着榄香烯浓度逐渐增加，Bcl2蛋白表达的阳性细胞百分率逐渐减低（表3）。表3榄香烯作用过的Hela细胞中Bcl2蛋白表达（略）　　3讨论　　榄香烯是一种国家二类抗癌药物，实验药理学及临床药理