一轮复习课件：选修1生物技术实践模块知识讲解.ppt

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1、一轮复习课件：选修1生物技术实践模块2、理解培养基的种类及应用（适当补充）按物理状态不同划分固体培养基液体培养基半固体培养基按化学组成不同划分：合成培养基/天然培养基按用途不同划分鉴别培养基选择培养基加入青霉素的培养基分离酵母菌、霉菌等真菌加入高浓度食盐的培养基分离金黄色葡萄球菌只有尿素作为惟一氮源的培养基分离出分解尿素的细菌不加氮源的无氮培养基分离固氮菌只有纤维素作为惟一碳源的培养基分离分解纤维素的细菌加入青霉素等抗生素的培养基分离导入了目的基因的受体细胞选择培养基做一些适当的补充（二）无菌技术无菌操作泛指在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法技术。获得纯净培养

2、物的关键是防止外来杂菌的入侵，无菌技术就是防止杂菌污染的操作技术。灭菌方法适用对象所需条件灭菌时间灼烧灭菌接种金属用具、试管口、瓶口在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧直至烧红干热灭菌能耐高温并需要保持干燥的玻璃器皿、金属用具等干热灭菌箱内，160～170OC中1～2h高压蒸汽灭菌培养基、实验器具等100kPa，121OC15～30min消毒无菌技术的种类灭菌使用较为温和的方法（酒精、紫外线）来杀死部分对人体有害的微生物。对实验操作的空间、操作者的衣着和手进行清洁消毒；将培养皿、接种用具进行灭菌；接种的过程要在酒精灯附近进行。使用较为强烈的理化因素杀死物体内外的所有微生物（包括

3、芽孢和孢子）。二、实验操作（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基1.牛肉膏蛋白胨固体培养基配方物质牛肉膏蛋白胨NaCl琼脂水重量5g10g5g20g定溶至100mL2.基本过程：称量→溶化→灭菌→倒平板高压锅灭菌冷却到50OC左右时倒基本过程：称量→溶化→灭菌→倒平板分离分解尿素的细菌：培养基中加入尿素为唯一氮源分离分解纤维素的微生物：培养基中加入纤维素为唯一碳源倒平板操作的讨论1.培养基灭菌后要冷却到50OC时倒平板。用什么办法来估计培养基的温度？用手触摸锥形瓶，温度下降到刚刚不烫手时即可开始倒平板。2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培

4、养基。3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。（二）纯化大肠杆菌微生物接种方法常见的有平板划线法和稀释涂布平板法。1.平板划线法通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面（操作如教材18页图示）

5、。在数次划线后可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体称菌落。优点：可以观察菌落特征，对混合菌进行分离缺点：不能计数一般用于分离微生物的纯种1、为什么在操作的第一步以及划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环？操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。划线结束后仍然要灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环

6、境和感染操作者。平板划线法的讨论2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？以免接种环温度太高，杀死菌种。3.在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。2.稀释涂布平板法将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面进行培养。在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个的菌落。稀释涂布平板法操作过程分两个步骤，

7、即系列稀释操作和涂布平板操作。优点：可以计数，可以观察菌落特征。缺点：吸收量较少，较麻烦，平板不干燥效果不好，容易蔓延。一般用于平板培养基的回收率计数系列稀释操作101102103104105106(1)将分别盛有9mL水的试管灭菌并编号。(2)用移液管吸取1mL培养的菌液，注入第二支试管中，轻压橡皮头，吹吸三次使之充分混匀。(3)从101倍稀释的试管中吸取1mL稀释液，注入第三支试管中，重复步骤2，直至到第六支试管。涂布平板操作(1)将涂布器浸在盛有70％的酒精的烧杯中。(2)取少量菌液（不超0.1mL），滴加到培养基表面。(3)将