第14章液相色谱法ppt课件.ppt

《第14章液相色谱法ppt课件.ppt》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、第20章高效液相色谱法HighPerformanceLiquidChromatography(HPLC)本章主要内容★HPLC的特点（与经典液相色谱和气相色谱比较）★提高HPLC柱效的方法★HPLC的仪器结构及其主要部件★几种常见的HPLC方法的原理及应用Aktaexplorer高压层析系统－紫外在线检测一、高效液相色谱（HPLC）的概念用高压输送（最高输送压力可达4.5107Pa）流动相（液体），用以特殊方法用小粒径填料（固定相）填充而成的色谱柱分离，同时柱后连有高灵敏度检测器，可对流出物进行连续检测的液相色谱

2、HPLC是在经典液相色谱和气相色谱的基础上发展起来的§20-1概述二、与经典液相色谱的比较经典LCHPLC柱内径1~5cm~0.4cm柱长度50~100cm15~50cm填充物粒度150~200m4~10m使用压力1~10atm50~200atm分离时间0.5~1天~10min1、基本特点高效、高速和高灵敏度GC采用的流动相中为有限的几种“惰性”气体，在分离中只起运载作用，对组分作用小；HPLC采用的流动相为液体或各种液体的混合，可供选择的机会多；它除了起运载作用外，还对分离产生很大贡献（分离可通过流动相控制或

3、改进）2、操作条件HPLC的分离速度、柱效和灵敏度均低于毛细管GC三、HPLC的特点（与开管气相色谱比较）流动相对分离起重要作用，且可以选择的流动相种类很多GC常在高流速和高温下进行；HPLC常在低流速和室温下进行。流动相流速与操作温度低三、HPLC的特点（与开管气相色谱比较）3、影响柱效有差别开管GC中无涡流扩散项，柱内效应主要由分子扩散决定HPLC中分子扩散可以忽略，柱内效应主要由涡流扩散和传质阻力决定柱内效应的影响因素与程度不同操作压力高GC采用低压(<5105Pa)分离；HPLC采用高压（(50350)

4、105Pa）分离2、操作条件★GC采用程序升温提高分离速度与分离效率，实现沸点相差很大的混合组分之间的分离★HPLC采用梯度洗脱提高分离速度与分离效率，实现极性相差很大的混合组分之间的分离三、HPLC的特点（与开管气相色谱比较）4、分析对象及范围更广：GC只限于气体和低沸点热稳定化合物(占有机物总数的20%)HPLC可分析高沸点、高分子量的稳定或不稳定化合物（占有机物总数的80%），3、影响柱效有差别柱外效应影响大HPLC的柱外效应比毛细管气相色谱严重提高HPLC柱效的方法★恰当提高柱温★减少填料的粒径和空穴深度

5、★采用低粘度和低流速的流动相★减少柱外死体积§20-2高效液相色谱仪一、HPLC仪器的结构流动相储器和溶剂处理系统高压泵系统进样系统液相色谱柱检测器1、基本组成：贮液器高压泵检测器梯度淋洗装置色谱柱压力表进样器馏分收集器记录仪进样系统分离系统检测系统附属系统一、HPLC仪器的结构2、HPLC仪器的结构及工作流程高压输液系统柱温箱二、流动相储器和溶剂处理系统1、贮液器配有孔径约为2m溶剂过滤器配有溶剂脱气装置2、流动相输入方式等度洗脱方式梯度洗脱方式在分离过程中，流动相的组成与性质保持稳定在分离过程中，流动相的组成

6、与性质按一定方式改变，以缩短分离时间，提高分离效率梯度洗脱方式类似与GC中的程序升温分离，主要用于极性差别很大的混合组分分离三、高压泵系统1、高压泵（1）对高压泵的要求有足够的输出压力且压力恒定、脉动小；输出流量恒定且范围可调；便于迅速更换溶剂；耐腐蚀（2）高压泵的种类往复式塞泵2、流速控制和程序系统恒压力泵螺旋注射泵四、进样系统直接注射进样——使用微量注射器进样特点：装置简单、死体积小；但进样量小且重现性差。高压六通阀进样装入样品出口进样采样环泵入溶剂进色谱柱特点：进样量可变范围大，进样准确，重复性好。自动进样特

7、点：进样量可变范围大，进样准确，重复性好，一次可连续进样上百个，适合于大量试样自动化分析。进样阀五、色谱柱（分离系统）——色谱仪的心脏1、色谱柱组成与种类要求——耐高压、柱接头的死体积小材料——内壁光滑的优质不锈钢或其它金属形状——柱长多为10~50cm，内径为4~5mm柱管固定相颗粒小（一般为20~75m；高效柱为3~10m）填充均匀填充方法：多彩用匀浆法溶剂要脱气，溶剂和样品应过滤，防止堵塞。加前置柱。更换流动相要渐变。用后要保护好。3、使用色谱柱注意事项2、保护柱与柱恒箱波长可的松氟美松皮质酮六、检测器1

8、、对检测器的要求灵敏度高、死体积小、线性范围宽、重现性好，响应快、噪音低、对温度和流速的变化不敏感，应用范围广2、常用检测器溶质性质检测器仅对组分的物理或化学特性有响应特点：种类：各种光谱及一些电化学检测器；如：紫外检测器、二极管阵列检测器、荧光检测器、红外检测器、伏安检测器总体检测器对组分及洗脱液总的物理或化学性质有响应示差折光检测器、介电常数检测器、电导