微生物实验课件：ELISA(酶联免疫吸附试验) (2).ppt

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1、凝集反应(ABO血型测定)ELISA(酶联免疫吸附试验)PFC预备7A208蒋朋飞凝集反应原理:颗粒性抗原与相应抗体发生特异性结合，并在一定条件下形成肉眼可见的凝集物。应用：检测未知Ag或Ab分类：1.直接凝集反应：2.间接凝集反应玻片法---ABO血型鉴定、菌种鉴定试管法---肥达反应ABO血型测定实验目的:检测待测者ABO血型材料:抗A和抗B血清,生理盐水,载玻片,采血针等.实验方法准备生理盐水管：0.5ml/管制备红细胞悬液:碘酒、酒精消毒无名指端,采血,1或2滴血液滴入生理盐水管中载玻片两端

2、分别加抗A,抗B血清各1滴载玻片两端分别加红细胞悬液各1滴,牙签混匀,10-15分钟内观察结果实验结果呈红色片状凝集颗粒为阳性实验结束后，洗涤试管；玻片置于消毒缸中；塑料滴管弃去ELISA(酶联免疫吸附试验)EnzymeLinkedImmunosorbentAssay免疫标记技术:将抗原、抗体的特异性反应与标记物相结合的新技术，用于定性或定量检测未知的抗原或抗体。免疫荧光法示意图直接法间接法①②1.已知抗原包被（HBsAg）2.加入待测标本（血清）4.加入酶标二抗6.加入底物3.洗涤5.洗涤EE底物

3、E底物ELISA间接法原理：间接ELISA法(酶联免疫吸附试验)颜色改变=待测标本中存在抗体1.包被已知抗原2.加入待测标本（未知抗体？）3.加入酶标二抗（即抗抗体：抗人Ig的抗体）4.加入底物洗涤洗涤不显色实验目的:检测血清标本中有无HBsAb材料:48孔ELISA板阳性对照血清（HBsAb）阴性对照血清酶标二抗洗涤液底物A和B微量加样器，待测血清标本等乙肝病毒表面抗体诊断试剂盒实验方法微孔板已包被HBsAgHBsAgABCD123456789101112++--------++++++①①①①④

4、④④④②②②②③③③③⑥⑥⑥⑥⑤⑤⑤⑤⑦⑦⑦⑦⑧⑧⑧⑧步骤：1、加入待检标本50ul；同时设阴性对照和阳性对照(分别各加1滴)2、加入酶结合物1滴/每孔，混匀，封板，37℃30min3、弃去每孔液体,用洗涤液洗涤每孔，5秒×5次，拍干板4、每孔加显色液A、B各1滴,混匀,37℃10-15min5、肉眼观察颜色深浅（+：蓝色；-：无色）颜色变化或OD（吸光度）值酶标仪酶标板实验结果思考ELSA实验中，待测标本是否含有乙肝表面抗体？为什么？ABO血型鉴定实验中，待测者的血型属哪一型？血型鉴定在临床中有什

5、么应用？肥达反应（Widalreaction，WR）是利用伤寒和副伤寒沙门菌菌液为抗原，检测病人血清中有无相应抗体的一种凝集试验间接凝集反应：可溶性抗原与相应抗体直接反应不出现凝集现象。将可溶性抗原包被在一种与免疫无关的颗粒状载体表面形成致敏颗粒，再与相应抗体反应，则出现凝集称间接凝集反应。常用的载体颗粒有人O型红细胞、绵羊红细胞、乳胶颗粒等。如载体颗粒是红细胞，称间接血凝试验；若为乳胶颗粒，则称为乳胶凝集试验