资源描述：
《菜籽粕中抗营养因子植酸酶解条件的研究.doc》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、菜籽粕中抗营养因子植酸酶解条件的研究菜籽柏中抗营养因子植酸酶解条件的研究摘要:在菜籽粕中直接添加外源植酸酶，作用于菜籽粕，使其一,种主要的抗营养因子（ANF）植酸分解，根据影响前反应的主要因素:温度、pH值、反应时间、酶浓度等进行单因素试验,选择合适的因素水平按L9（34）设计,通过正交试验对酶解条件进行了优化。结果表明：植酸酶酶解的优化条件为温度45c、pH值4.7、反应时间90min、酶浓度2.4%（菜籽粕量），植酸酶解率可达60%。关键词:菜籽柏；植酸酶；抗营养因子;酶解条件；饲料木文采用直接添
2、加外源植酸酶以降低菜籽粕中植酸的含量，研究酶解的温度、pH值、酶的浓度、酶解时间等因素，以期寻求到最佳的酶解条件，为酶制剂更好地应用于菜柏蛋白提供基础的研究。1材料与方法1.1材料、试剂与仪器菜籽粕（中牧饲料制造有限公司提供）、植酸酶（5000U/g）（北京昕大洋科技发展有限公司提供）、浓硫酸、钥酸铉、抗坏血酸、醋酸、醋酸钠等均为分析纯。紫外分光光度计、pH计、电热鼓风干燥箱。1.2试验方法1.2.1植酸测定（钥兰比色法）[1、2]1.2.1.1标准曲线制作称取定量磷酸二富钾，按梯度制成标准溶液，以无
3、机磷含量对应其吸光度值，作标准曲线，得I口1归方程。1.2.1.2样品中植酸含量测定称取定量预处理的样品，制成•定稀释度的样品液待测。分别取两份，一,份消化后测其吸光度值,另一份不经消化直接测吸光度值,然后根据两者差值，由磷酸二氢钾标准曲线算出植酸磷含量，再乘以换算因子3.55,得出植酸含量。1.2.2植酸酶酶解条件单因素试验1.2.2.1前浓度试验准确称取8份预处理后的菜籽粕50g,加入醋酸-醋酸钠缓冲液使之pH值为4.7,按表1分别加入不同水平的植酸酶，搅拌均匀于45e温度下酶解120min。表1
4、酶浓度单因子试验方案试验号12345678植酸酣水平/%00.40.81.21.62.02.42.82.2.2酶解温度试验准确称取6份预处理后的菜籽柏50g,加入醋酸-醋酸钠缓冲液使之pH值为4.7,和1.6%植酸前搅拌均匀，按表2控制不同酶解温度酶解120mino表2酶解温度单因子试验方案试验号123456酶解温度/。3545556575853.2.3酶解时间试验准确称取6份预处理后的菜籽粕50g,加入醋酸-醋酸钠缓冲液使之pH值为4.7,和1.6%植酸酶搅拌均匀，控制酶解温度45e,按表3酶解不同
5、时间。表3酶解时间单因子试验方案试验号123456酶解时间/min3060901201501801.2.4酶解pH值试验准确称取6份预处理后的菜籽粕50g,分别加入1.6%植酸酶，按表4加入醋酸-醋酸钠缓冲液控制不同酶解pH值，于45e下酶解120min。表4酶解pH值单因子试验方案试验号123456pH值3.43.54.74.84.95.01.2.3植酸酶酶解条件正交试验及优化方案验证结合单因素试验结果和工业化可实现性,选择各因素合适水平进行正交试验，考察各因素水平组合对植酸防酶解的影响，见表5。表
6、5植酸酶酶解条件正交试验因素水平表水平因素温度/epH值酶浓度/%酶解时间/min1234045354.74.84.91.46090120将正交试验得到理论优化方案与正交试验中吸光度值最高的试验号分别再做3个平行样，比较吸光度值大小，以进行理论优化方案的验证。2结果与分析2.1植酸测定2.1.1植酸标准曲线制作回归方程:C=0.172A,r=0.9986;A为吸光度值;C为对应磷含量,mg/mlo2.1.2酶解效率称取10g左右样品，30ml的体积分数为10%HCl溶解，从中吸取2ml定容至50nil
7、制得样品液，测吸光度。32刘军等:菜籽粕中抗营养因子植酸酶解条件的研究/2009年第1期酶解效率=(Cl-C0)@3.55@50@30/m样置总,式中,C1为防解液的磷含量,mg/m;lC0为未处理菜籽粕样液磷含量,样为样品质量，g；C总为菜粕植酸总含量，mg/g(本试验菜粕植酸含量为28.9882mg/g);3.55为无机磷与植酸的转换系数。2.2植酸酶解条件试验结果2.2.1酶浓度对酣解效果的影响由图1看出，随若前浓度的增加，吸光度值逐渐增大，也即被酸解的植酸量逐渐增多，酶解效果呈现上升趋势。当酶
8、浓度由1.2%增加到1.6%时，吸光度值快速增加，变化幅度很大;酶浓度为1.6%时的酶解率为52.1%。再继续增加酶的用量，吸光度值的变化幅度逐渐减小，说明继续增大酶用量LA经不能够增强酶解效果。图1酶浓度对植酸酶酶解效果影响2.2.2酶解温度对酶解效果的影响由图2看出，当温度在35~65e之间时，吸光度值随着温度的升高而增加,被酶解的植酸量增多，酶解效果逐渐加强。但当温度继续升高时,吸光度值又快速减小，表明该植酸酶在65e附近有较高的活性，酶解率可达到
