体外酶解菜籽粕最适条件的研究

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1、科技视野HORIZONOFSCIENCEANDTECHNOLOGY体外酶解菜籽粕最适条件的研究122222222魏杨孙玲红王在贵张影李明珠徐星豪董颖吴越杨濡（1.河南省焦作市畜牧局；2.安徽农业大学生命科学学院）［中图分类号］S816.7［文献标识码］A［文章编号］1002-8358（2015）23-32-3摘要：本实验以菜籽粕为底物，研究纤维素酶和木聚次于纤维素，约占细胞干重的35%。木聚糖酶可以分糖酶体外酶解菜籽粕的最适反应条件。分别在温度为35℃、解饲料中的木聚糖，降低饲料中的非淀粉糖，促进营37℃、39℃、41℃，以及pH为4.0、5.0、6.0、7.0、8.0的条

2、件养物质的吸收利用，从而改善饲料性能，消除或降低下，研究纤维素酶和木聚糖酶降解菜籽粕的最适反应情况。非淀粉多糖在动物肠胃中因粘度较大而引起的抗营结果表明，纤维素酶降解菜籽粕的最适温度为37℃、最适[5]养作用。目前，大部分研究集中于纤维素酶和木聚pH为6.0；木聚糖酶降解菜籽粕的最适温度为39℃、最适[4]糖酶对麦类饲料的影响，而对蛋白质饲料影响的研pH为5.0。比较而言，纤维素酶对菜籽粕的降解效果优于究较少。因此，本试验以菜籽粕为酶解对象，对不同木聚糖酶。温度和pH反应条件下纤维素酶和木聚糖酶体外酶关键词：菜籽粕；纤维素酶；木聚糖酶；最适条件解作用效果的研究，为菜籽粕及其

3、他饲料原料在动菜籽粕是菜籽榨油后的副产物，我国菜籽粕的物饲料中的合理使用提供一定的依据。产量大，价格低，蛋白质含量丰富，干基含量为[1]40.2%~42.8%，而且其氨基酸组成合理，是很好的1材料与方法饲料原料。菜籽粕中含有较多的非淀粉多糖，主要1.1试验材料包括纤维素、木聚糖、果胶等，这些非淀粉多糖难以菜籽粕（经烘干、研磨充分、干燥备用）；被单胃幼龄动物消化利用，且能结合大量的水，导纤维素酶（酶活力为14.477IU/g，保存于-29℃致采食动物的消化道中食糜体积增大、粘度增大阻冰箱中备用）；[2]碍营养物质特别是蛋白质和脂肪的吸收，最终导木聚糖酶（酶活力未知，保存于-2

4、9℃冰箱中备致营养物质消化吸收率下降，即非淀粉糖的抗营养用）。作用。因此，菜籽粕的饲用品质有待改进。1.2仪器与试剂添加酶制剂是常用改善饲料品质的方法，已有仪器：分光光度计、离心机、水浴锅、电子分析大量的试验证实，通过加入合适酶制剂进行酶解消天平等等。化，可大大提高这些原料的消化率，促进动物健康试剂：葡萄糖标准液（1mg/mL），Na2HPO4-柠檬[3-4]生长。纤维素是自然界含量最为丰富的有机物，酸缓冲溶液，DNS试剂。其水解产物为能被动物利用的葡萄糖，优化纤维素1.3方法与步骤酶的反应条件，对纤维素资源的开发利用具有重要1.3.1葡糖糖标准曲线的制作的意义。木聚糖是半

5、纤维素的一种，属植物细胞壁分别吸取浓度为1mg/mL的葡萄糖标准液0、中的结构性非淀粉多糖，在植物细胞壁中的含量仅0.2mL、0.4mL、0.6mL、0.8mL、1.0mL、1.2mL于试管32HORIZONOFSCIENCEANDTECHNOLOGY科技视野2中，每组3个平行，用蒸馏水补加到2mL，然后每管绘制标准曲线为y=0.227x-0.006，其中R=加蒸馏DNS试剂1.5mL。0.9957将各管摇匀，在沸水浴中加热5min取出，冷却酶活A=x/（t×v）至室温，用蒸馏水定容至20mL，混匀，在540nm波其中，x为还原糖的生成量；t为反应时间；v为长下测其吸光值，

6、用0号管调零。测出各管的吸光酶液的体积值，以葡萄糖含量（mg）为横坐标，吸光值为纵坐标，则酶活A=（y+0.006）/（0.227×0.2×45）绘出标准曲线。2.2影响纤维素酶降解菜籽粕活力条件的研究酶活力单位定义：在一定条件下，1min从底物由图2可知，纤维素酶对菜籽粕降解效果在不转化1μg还原糖所需要的酶量，称为一个酶活力单同温度和不同pH值条件下呈现规律性变化。从pH位（U）。值条件来看，随着pH的增大，酶活力先增加后减1.3.2酶液的制备少，在pH为6.0时达到最大值。从温度条件来看，准确称取0.1000g纤维素酶粉至小烧杯中，用降解效果先是随温度的增加而增加，在

7、37℃达最大少量去离子水溶解后，用去离子水定容至100mL，值，之后随着温度的增加而减少。此酶液浓度1g/L，4℃冰箱中保存备用。同理可以制纤维素酶降解菜籽粕的最适pH为6.0，最适温备1g/L的木聚糖酶液，4℃冰箱中保存备用。度为37℃，最适条件下，纤维素酶活为0.150U/mL。1.3.3纤维素酶降解反应体系及反应条件的设定准确称菜籽粕0.300g，加入试管中，再加入1.8mL缓冲溶液，预热5min，加入0.2mL纤维素酶液，摇匀，分别于35℃、37℃、39℃、41℃（每个温度条件下再分别设置pH值4.0、5.