梅毒两种检测方法的灵敏度和特异性比较.doc

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1、梅毒两种检测方法的灵敏度和特异性比较湖南省长沙市岳麓区疾病预防控制中心检验科410013摘要：目的:探讨酶联免疫吸附试验法(ELISA)和明胶颗粒凝集试验法(TPPA)检测梅毒螺旋体的灵敏度和特异性。方法:将200例确诊梅毒感染的血液样本列入检查组，将200例体检梅毒阴性的血液样本列入对照组,所有样本均分别采用ELISA和TPPA两种方法进行检测，比较两种检测方法的灵敏度及特异性。结果：TPPA法检测灵敏度为99%〃明显高于ELISA法的检测灵敏度93.5%,具有显著差异(P<0.05)；TPP

2、A的检测特异性为99.5%,也高于ELISA法的检测特异性95%,两种有显著差异(PV0.05)。结论：明胶颗粒凝集试验法(TPPA)进行梅毒检测其灵敏度和特异性均高于酶联免疫吸附试验法(ELISA),用于检测梅毒准确率较高，可以用于梅毒确证实验。关键词：梅毒螺旋体；酶联免疫吸附试验；明胶颗粒凝集试验梅毒是一种系统性的性传播疾病，病原体苍白(梅毒)螺旋体，性接触是其主要传播途径，少数可通过输血、母婴传播，根据其临床表现分为一期、二期、三期、潜伏期和先天(胎传)梅毒等⑴。由于梅毒是系统性疾病，感染

3、后可以累及到身体各个器官与组织，且病程漫长，造成多系统的损伤，严重危害患者健康，而患有梅毒的孕妇可通过胎盘传染给胎儿，分娩出梅毒胎儿或引起流产、早产、死胎，给患者及家庭带来巨大的痛苦［1］。报告显示⑵，近年来梅毒在我国的感染人数呈逐年增高的趋势，己然成为感染人数最多的性传播疾病。因此，快速准确的检测出梅毒阳性患者，对他们进行及时治疗和生活生育指导意义重大。梅毒血清学试验方法很多，有特异性和非特异性两类，特异性方法包括梅毒螺旋体酶联免疫吸附试验(ELISA)、梅毒螺旋体颗粒凝集试验(TPPA)、化

4、学发光法(CMIA)及胶体金法等，其中前两种最常用［3］。本文针对这两种方法检测梅毒的灵敏度和特异性进行分析，现将结果报道如下。1资料与方法1.1一般资料检查组的标本来自2013年1月-2014年6月在我中心确诊的200例确诊梅毒感染的患者血样，确诊根据临床症状和梅毒螺旋体的检测的结果。患者中男性113例，女性87例，年龄20〜65岁,平均(33.3±4.7)岁;病程3〜25年，平均(10.1±3.1)年;200例患者中潜伏期梅毒21例,一期梅毒88例，二期梅毒65例

5、，三期梅毒26例。对照组的标本来自于我我单位体检中心同期体检结果为梅毒阴性的200例健康人血样，其中男性121例，女性79例，年龄22〜64岁,平均(35.2±5.1)岁。1.2试剂和方法空腹抽取病人促凝全血样本，3500r/min离心2分钟分离上清液，静置室温或4°C环境保存备用。洗板机采用赛默飞世尔科技公司提供的全自动立式洗板机，酶标仪采用TECANsunrise酶标仪。ELISA法所用试剂盒为珠海丽珠试剂股份有限公司生产的96T,TPPA：使用富士瑞必欧公司生产的试剂盒。12

6、1酶联免疫吸附试验法(ELISA)：取出所需板条平衡30min至室温。①加样：设置阴性对照3孔、阳性对照2孔，分别加入阴性、阳性对照各50ul；设置空白对照1孔，不加样品。其余孔加入待测样品50uL②温育：置37°C温育60mino③洗涤：反应完成后取出用洗板机洗板6次，并在吸水纸上拍干。④加酶：空白对照孔不加酶标记物。其余孔加入酶标记物50ul,震荡混匀。⑤温育：置37°C温育30mino⑥洗涤：反应完成后取出用洗板机洗板6次，并在吸水纸上拍干。⑦显色：每孔加入底物缓冲液50μL,再加入

7、底物液50μL,震荡混匀，置37°C温育30min。⑧终止：所有孔加入终止液50μL,轻拍混匀。⑨：读值：用酶标仪读值，在单波长450nm处(须以空白对照孔校零)读取各孔的OD值。实验结果符合阴性、阳性和空白对照标准，样品OD值≥临界值为TP抗体阳性;样品OD值V临界值为TP抗体阴性。(临界值二阴性对照平均OD值+0.10)1.2.2明胶颗粒凝集试验法(TPPA)：于室温下使用稀释液在U型反应板上对各血清样本进行稀释处理，一共6孔，稀释度依次为1：10、1：20、1：40、1：

8、80、1：160、1：320；混匀细胞工作液，第2孔加25µl未致敏颗粒（最终稀释度1：40）,第3、4、5、6孔加25µl致敏颗粒（最终稀释度1：80、1：160、1：320、1；640、1：1240）,加盖，15°C-25°C孵育2h。结果判定：阴性（-）颗粒聚集在孔底中央、光亮、边缘光滑，可疑（±）颗粒浓集呈边缘光滑小环状阳性，阳性（1+）颗粒凝集呈多边形性粗糙大环状，阳性（2+-4）颗粒凝集覆盖整个孔底，多边形膜状，边缘粗糙。以出现阳性（1+）的最高