果蝇基因组DNA的提取.doc

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1、果蝇基因组DNA的提取实验原理使用消化缓冲液使DNA从细胞内释放出来，65度温育可以加速DNA溶解，酚——氯仿异戊醇抽提可以将蛋白质与DNA分离，冷的异丙醇沉淀DNA，70％的乙醇洗去DNA表面的残留有机溶剂。实验材料新鲜存活的果蝇或－20℃冻存1h的果蝇个体5～10个。四、实验仪器及用具器具：玻璃棒、烧杯、离心管、量筒、分析天平、水浴锅、台式高速离心机、4℃冰箱、长玻璃吸管、微量加样器、枪头、紫外分析仪、琼脂糖电泳装置。药品和试剂酚（Tris饱和酚）、氯仿、异戊醇、十二烷基硫酸钠(SDS)、Tris碱、乙二胺四乙酸（EDTA）、异丙醇。溶液配制：消化缓冲液：含100

2、mM的Nacl，10mMTris.cl（PH8.0）,25mM的EDTA（PH8.0）,0.5％的SDS。TE缓冲液（PH8.0）：含10mMTris.cl（PH8.0）,1mM的EDTA（PH8.0）。实验步骤1）取10只麻醉的果蝇放入1.5ml离心管中，加入消化缓冲液30μl，捣碎。2）补加消化缓冲液400μl，混匀，置65℃温浴30分钟每10分钟摇荡一次，以使样品被充分消化。3）取出离心管，加入400μl酚，400μl氯仿：异戊醇（24：1）的混合物，盖紧管盖，上下颠倒充分混匀，抽提样品5min（放在“摩天轮”上旋转5min）,12000rpm离心5分钟。4）小

3、心吸取上清转移至新的离心管中。加入400μl异丙醇，轻轻混匀3min，此时可见白色线团状物质出现。5）14000rpm离心10分钟，让线团状物质沉到管底或管壁，小心倒出液体。6）用400μl70％的乙醇洗涤沉淀，12000rpm离心5min,倒掉乙醇，倒置晾干至乙醇味道消失，沉淀用50μlTE缓冲液溶解。