养正消积胶囊微生物限度方法学探究

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1、养正消积胶囊微生物限度方法学探究　　摘要：目的研究养正消积胶囊微生物限度检查法的准确性和可靠性，并对该品种进行微生物限度检查方法的验证。方法采用培养基0.5ml稀释法，分别使用5种实验菌株，采用菌液组、供试品对照组、实验组、稀释剂对照组进行3次独立平行试验，分别计算各实验菌每次实验的回收率。结果各实验菌的回收率均大于>70%.结论采用培养基0.5ml稀释法进行该药品的微生物限度检查，方法简便可行，重现性好。关键词：养正消积胶囊；微生物限度；回收率5养正消积胶囊是在中医络病理论指导下研制的一种抗肿瘤的中药复方制剂，由黄芪、女贞子、莪术、人参、灵芝、

2、绞股蓝、土鳖虫、白术、半枝莲、白花蛇舌草、白英、蛇莓、茵陈、徐长卿、鸡内金等组成。据络病理论研究的“三维立体网络系统”空间位置概念和络病的主要病理变化，认为恶性肿瘤的病变部位在于脏腑阴络，脾肾亏虚为其发病之本，热毒滞络、络息成积为其重要病机。治疗以健脾益肾治其本，使脾肾功能旺盛，发挥“养正积自除”之功；辅以化瘀解毒、散结通络之法以治其标，使络通瘀去，热清毒化。然而养正消积胶囊处方中含有的多味中药材含有抑菌成分，可抑制污染微生物生长，这就给药品造成了安全隐患，因此为了更好而有效的保障该药品的质量，我们根据《中国药典》2010年版【1】的要求对养正消

3、积胶囊进行了微生物限度检验方法验证，以期获得更具科学性和准确性的微生物限度检查方法，从而保证检验结果的准确性【2】。1仪器与试药1.1仪器生物安全柜：美国FrontlineFHC-1200A；生化培养箱；LRH-250F；干热灭菌烘箱：FD204。1.2实验菌种金黄色葡萄球菌【CMCC（B）26003】、枯草芽孢杆菌【CMCC（B）63501】、大肠埃希菌【CMCC（B）44102】、白色念珠菌【CMCC（F）98001】、黑曲霉【CMCC（F）98003】，来源：中国药品生物制品检定所。1.3培养基及稀释剂营养琼脂培养基20120702、改良马

4、丁琼脂培养基121018玫瑰红钠琼脂培养基20121209、营养肉汤培养基120610、改良马丁培养基120417，来源：中国药品生物制品检定所。1.4样品养正消积胶囊石家庄以岭药业股份有限公司提供批号120601、120602、120603.2方法与结果2.1菌液制备2.1.15接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中，培养18～24小时；接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基中，培养24～28小时。上述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液制成每lml含菌数为50～1OOcfu的菌悬液。2.1.2接种黑曲霉的新鲜

5、培养物至改良马丁琼脂斜面培养基中，培养5～7天，加入3～5ml含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。然后，采用适宜的方法吸出孢子悬液至无菌试管内，用含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液制成每lml含孢子数50～1OOcfu的孢子悬液。2.1.3菌液组计数：取1ml上述制备的菌液，加入相应的3块培养基培养，平板计数。2.2供试品对照组取供试品10g，加pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液中至100ml，取供试品lOg，加pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至1OOml，溶解，混匀，作为1：

6、10的供试液。取此液10倍量递增稀释制成1：100，1：1000的供试液。2.3方法2.3.1预实验取1：10供试液1ml和上述制备好的阳性对照菌液1ml置平皿中，加入营养琼脂培养基或玫瑰红钠琼脂培养基，混合均匀，放置凝固后，置培养箱中培养。每株试验菌平行制备2个平皿，计数，计算回收率。结果如下：5由以上试验证明本品对金黄色葡萄球菌有一定抑菌性，故采用培养基稀释法进一步对金黄色葡萄球菌进行实验对比。2.3.1确认试验经过多次实验对比得出最佳方法：取供试品10g，加pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液中至100ml，制成1：10的供试液，静置，取1：

7、10供试液上清液每皿0.5ml，每4个平皿为一组。取上述制备好的阳性对照菌液1ml，分组注入平皿中，倾注琼脂培养基，混匀，凝固后，倒置培养。按平皿法测定其菌数，计算回收率，结果如下：3讨论上述实验表明，本品采用常规法对大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌和黑曲霉均无影响，其实验组回收率均达70%，故霉菌及酵母菌可采用常规法进行微生物限度检查，但由于本品对金黄色葡萄球菌具有明显的抑菌性，即采用培养基稀释法（0.5ml/皿）进行方法学验证，经过3次独立平行试验，结果显示回收率均>70%，因此可采用培养基0.5ml稀释法进行养正消积胶囊微生物限度的检测

8、。参考文献：[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典：1部[M].北京：中国医药科技出版社，2010：79～85.[2]肖庆青.《中国药