石蜡包埋基本流程.doc

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1、石蜡包埋基本流程一、取材和固定取材宜小不宜大，一般不超过1cm3,分离后应迅即杀死固定。用4%PFA固定24小时以上，流水冲洗24小时，置于70%~80%乙醇中，可长期保存。二、脱水脱水的目的是除去组织中的水分，便于透明、浸蜡和包埋，因为这些步骤的试剂均不能与水混溶，故必须脱水。脱水不宜操之过急或时间过长，一般为50%→70%→80%→95%（此时可加番红，使组织着色便于包埋时定位）→100%，每级停留2~4小时或更长，但无水乙醇中时间宜短。1、95%乙醇两道I2~4hII2h2、无水乙醇两道I1hII1h三、透明透明的目的是将脱水剂从组织中除去，二甲苯既能与乙醇混合，又能与石蜡混溶，其

2、穿透能力强，但易使材料变脆，使用时不能停留过长，若组织放入二甲苯中有白色混浊出现，说明脱水不彻底，应退回纯乙醇中再行脱水3、二甲苯+无水乙醇（1:1）20min4、二甲苯两道I20minII20min四、浸蜡此步的目的是逐渐除去透明剂，并为包埋剂所替代。浸蜡过程一般从低温到高温、从低熔点到高熔点逐步进行，浸蜡需彻底。5、浸软蜡（50~52℃）两道I30minII90min6、浸硬蜡（56~58℃）I60minII30min五、包埋注意温度、切面、组织摆放的空间位置。可将样品编号封于蜡块上，以免样品混淆。