石蜡包埋组织RNAOUTPETRNAOUT

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1、天CAT#:81102-30低温运输，4℃保存净沙系列石蜡包埋组织RNAOUTPETRNAOUT使用手册V1.1北京天恩泽基因科技有限公司北京市海淀区上地信息路26号北京市留学人员海淀创业园中关村创业大厦506网址：www.tiandz.com；电话：400-6765278；电邮：order@tiandz.com产品及特点石蜡包埋组织本是珍贵的分子生物学研究材料，但是由于它们的保存时间一般都比较长，很不容易从中提取到可以进行PCR的RNA，存在的主要问题是RNA的降解和脱蜡过程中样品的丢失。本产品是专门用于从甲醛和非甲醛固定的石蜡包埋组织中快提RNA的

2、试剂，具有下列特点：1.一管式操作，避免了可能的交叉污染和样品RNA的丢失。2.含一步离心式脱蜡试剂，不需要使用有毒的二甲苯，健康环保。3.能有效去除基因组DNA的污染，得到的RNA可直接用于RT-PCR反应。4.即开即用，客户自己不需要准备额外的试剂。规格及成分成份编号30次包装溶液A81102A30mL溶液B81102B3mL溶液C81102C5mL溶液D81102D15mL微量核酸沉淀剂5090330mL（CAT#:50903-30）RNase-free水8040310mL使用手册81102sc1份运输及保存低温运输，4℃保存（溶液C需要-20℃

3、放置），有效期一年。自备试剂氯仿、75%乙醇。使用方法1.将5片厚度为6-8um的石蜡包埋组织切片转移到1.5mL塑料离心管(最好使用螺旋盖离心管)中并加入1mL溶液A，在振荡器上以最大速度振荡10秒。2.加入75uL溶液B，在振荡器上以最大速度振荡10秒。3.7000×g室温离心2分钟，溶液将形成两个相，其中组织切片位于下相。4.小心吸弃上层液体。5.将离心管放入真空抽干机中抽干下层的液体，一般需要一小时。6.加入150uL溶液C，55℃保温过夜。7.短暂离心，95℃保温10分钟。8.加入0.5mL溶液D，充分震荡半分钟。9.加入0.1mL自备氯仿，

4、振荡器上充分振荡混均30秒。10.13000-5000×g室温离心3-5分钟。11.将上清液（约0.6mL）转移到另一干净的1.5mL塑料离心管中。下层有机相（蓝色）和中间层含有DNA和蛋白质，避免触及，否则将产生蛋白质和DNA污染。为保险起见，可以留下100uL上清液不取。同时吸取上清时最好缓慢进行，否则容易吸出交界面的不可见的DNA。12.在上清液中加入两倍体积的微量核酸沉淀剂，振荡器上振荡30秒混匀。13.13000-15000g室温离心5分钟，离心底的侧面将形成RNA沉淀。如果需要提高RNA回收率，可以将离心时间延长到20或30分钟。14.小心

5、吸弃上清液，注意不要吸弃RNA沉淀。15.在含RNA沉淀的离心管中加入1mL自备的75%乙醇，振荡混匀30秒。16.13000-15000g室温离心1分钟。17.小心吸弃上清液，注意不要吸弃RNA沉淀。18.短暂快速离心，用移液枪小心吸弃残留乙醇(约50uL)。注意不要吸弃沉淀。此步十分重要，否则残留的乙醇会影响RNA的使用。19.室温放1-2分钟后立即加入50-100uLRNA溶解液使RNA沉淀溶解。千万不要用真空离心法使RNA沉淀过于干燥，否则RNA将变得十分难溶。样品立即使用或存放于-80℃待用。20.RNA完整性的电泳检测：21.RNA产量产率

6、测定：将5-10μLRNA溶于TE缓冲液中(pH7.5-8.2之间)检测其在OD260的光吸收。通过光吸收可以得出RNA浓度（1OD260的RNA=40μg/mL），进而计算出RNA的产量（浓度×体积)和产率(RNA产量/组织用量)。22.RNA纯度测定：无污染的总RNA的OD260/OD280一般在1.8-2.1之间(具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关)，高于此范围则分别表示样品可能有蛋白质污染，但一般不影响RT-PCR等反应。背景资料甲醛固定组织细胞的分子机制--蛋白质部分关联产品一步离心式石蜡清除降剂(CAT#:70302-100)