石蜡包埋与HE染色.doc

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1、组织的石蜡包埋与切片一、石蜡包埋（1）取材。将需要石蜡包埋的组织取下，并放入1×PBS中清洗。（2）组织固定。将组织放入4%多聚甲醛（或4%甲醛）中固定24小时至48小时。（3）逐级酒精脱水。75%酒精→85%酒精→95%酒精I→95%酒精II→100%酒精I→100%酒精II，将组织块在各级酒精中浸泡1小时，脱去组织中的水分。（4）二甲苯透明。二甲苯I→二甲苯II各15分钟，或适当延长二甲苯浸泡时间，直至组织透明为止。（5）浸蜡。将淋巴结组织及其标签按顺序依次放入液体石蜡中（60℃孵育箱），依次浸润石蜡I→石蜡II→石蜡III，分别浸润20至30分钟（

2、可依据组织的大小调整浸蜡时间）。（6）包埋。将已经充分浸润液体石蜡的组织进行包埋，包有组织的石蜡块自然冷却并凝固后存放于4℃冰箱。二、组织切片（7）使用leica切片机进行组织切片，每张切片的厚度约为4至5μm。（8）将含有组织的石蜡切片放于39~40℃水浴锅，使组织切片充分展开。（9）使组织切片贴于载玻片上，避免气泡产生。（10）烤片。把已贴有组织的载玻片放在60ºC烤箱中过夜，可观察到玻片上的石蜡溶化成泪滴状，准备进行HE或免疫组织化学染色。苏木精&伊红染色（Hematoxylinandeosinstain,H&Estain）（1）切片脱蜡至水。二甲

3、苯I→二甲苯II→二甲苯III各10分钟；100%酒精I→100%酒精II→95%酒精I→95%酒精II→85%酒精→75%酒精→蒸馏水各5分钟。（2）苏木精染细胞核。苏木精溶液染2~3分钟后，置于清水中漂洗。（3）盐酸酒精分色。显微镜下观察，如果染色过深，用1%的盐酸酒精（75%酒精配制）脱色数秒，可将胞浆非特异性染色脱去。（4）返蓝。将玻片置于蒸馏水中5分钟，使苏木精着色逐渐变蓝。（5）75%酒精→85%酒精各10分钟。（6）伊红染细胞质。将玻片浸入伊红染液中约1分钟，镜下观察，使苏木精和伊红着色对比度适中。（7）逐级酒精脱水。95%酒精I→95%酒

4、精II→100%酒精I→100%酒精II各10分钟。（8）二甲苯透明。二甲苯I→二甲苯II→二甲苯III各10分钟。（9）树胶封片。取适量的树胶滴在玻片上，小心盖上盖玻片，避免气泡产生，室温晾干，准备镜下观察。（10）尼康显微镜观察并拍照。分别在4×、10×、20×和40×物镜下观察实验组和对照组中组织形态并拍照。