石蜡切片制备基本步骤(附he染色步骤)

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1、石蜡切片制备基本步骤                                      一、准备工作（一）洗涤实验所需器皿：（玻璃器皿的清洗）1、 用洗衣粉将玻璃器皿表里擦洗干净反复洗刷2、 将器皿在自来水下冲洗干净3、 将器皿倒扣在铺有吸水纸或纱布的桌子上控干注：一般情况下，经以上步骤后，用蒸馏水洗过1~3次即可烘干备用，如果做特殊染色还需浸泡在酸性清洁液内12~24小时，再经自来水彻底冲洗，再用蒸馏水过洗1~3次烘干备用。（二）配制：硫酸洗液的配制清洁液（洗液）的配制：成分强酸液次强酸液弱酸液浓硫酸（ml）1000200100重铬酸钾（mg）63120100蒸馏

2、水（ml）2002001000  重铬酸钾1200g蒸馏水2000ml将2000ml浓硫酸缓缓倒入上述溶液中，边倒边用木棒轻轻搅拌（三）载玻片与盖玻片的处理1.       将所需载玻片与盖玻片清洗后，放入硫酸重铬酸钾溶液中浸泡24小时2.       流水冲洗，再用蒸馏水冲洗3遍3.       95%~100%酒精浸泡24小时，用绸布擦干备用注：在将载玻片与盖玻片放入清洁液中时，要一片片地投入，使其不致重叠。二、常用液体的配制（一）缓冲溶液：1．磷酸盐缓冲液A液：0.1mol/L磷酸二氢钠B液：0.1mol/L磷酸氢二钠A液与B液按比例混合调整到所需的PH值（3：7≈P

3、H7.0）2．枸椽酸缓冲溶液A液：0.1mol/L枸椽酸B液：0.1mol/L枸椽酸钠A液与B液按比例混合调整到所需的PH值（6.2：42.8≈PH6.2）（二）固定剂：1．甲醛：10%甲醛福尔马林100ml蒸馏水900ml注：实际甲醛含量只有3.6~4.0%但习惯上都将其视为10%。2．10％中性福尔马林钙固定液甲醛液10ml蒸馏水90ml加碳酸钙至过饱和(以容器底部碳酸钙沉淀1~2cm厚为适度)充分振荡混合后，放置24小时取上清液使用。3．4%多聚甲醛：8%多聚甲醛多聚甲醛8g蒸馏水100ml加温至60℃左右，不时搅拌，成为乳白色溶液。滴加1NNaOH，并不停搅动至液体

4、清明。1NNaOHlN等于1L溶液中某种物质1mol除以该物质的氢当量价所得数值的量氧化钠(NaOH)；分子量＝40．005，当量价＝11NNa0H的配制方法为：m＝40．005／1＝40．005g。取40．005gNaOH溶解于1L蒸馏水中4%多聚甲醛8%多聚甲醛50ml0.1M磷酸盐缓冲液50mlPH7.2先取50ml8%多聚甲醛，用0.1M磷酸二氢钠和0.1M磷酸氢二钠将PH值调至7.24．Bouin液：苦味酸饱和水溶液75ml36％~40％福尔马林液25ml冰醋酸5m15．改良Bouin氏固定液苦味酸饱和水溶液45ml95%酒精45ml36％~40％福尔马林液5ml

5、冰醋酸5m16．Carnoy液：冰醋酸10m1氯仿30m1无水乙醇60m1以上三者临用前混合，预冷至4℃后使用。24小时后固定液失效。（三）染色液1．Harris苏木精液A液：苏木精1g无水酒精10mlB液：铵矾或钾矾20g蒸馏水200ml氧化汞0.5ml冰醋酸8ml将矾溶于水，加热溶解（B液），稍冷后将苏木精酒精液（A液）混入B液，加热，稍冷却，加氧化汞，再继续加热1分钟，染液变为紫色，注意在加氧化汞时宜逐渐少量加入，防止染液溅出。全冷后呈深紫色，将烧杯口用纱布盖好，隔夜过滤，在过滤液内每96ml中加4ml冰醋酸，放置1周后成熟，即可用于染色，保存期1~2个月。此染液在加

6、醋酸后，对核染色特具选择性，故很适于脱落细胞的核染色。由于染液内已加有氧化剂，故不能长期储存，但利于配后即用。2．Mayer苏木精掖苏木精1g钾矾或铵矾50g碘酸钠0.2g蒸馏水1000ml水合氯醛50g枸橼酸1g将苏木精，钾矾及碘酸钠依次加入水内，略加热并搅拌，此时液体呈蓝色，待全溶后过夜。再加入水合氯醛及枸橼酸并加热至煮沸5分钟，冷后过滤备用。如不急用可不煮沸而在室温待其成熟，染液可较长期贮存使用。核染色鲜明，染色时间5—10分钟。用该染液染色后，不需分化，充分水洗蓝化后即可，伊红复染细胞质，使用一段时间后就要换新溶液。3．Hasnsen甲矾苏木精的配制A液：苏木精1g

7、无水乙醇10mlB液：钾矾20g蒸馏水200mlC液：高锰酸钾1g蒸馏水16ml三液分别溶化后，将A液倒入B液，再加入C液3ml，充分搅拌均匀后加热至沸腾，1分钟左右，将容器置于冷水中使其迅速冷却，此液配后即可使用，染后无需碱化，细胞核即为蓝色，效果较好，高锰酸钾可以迅速氧化苏木精（每1g苏木精需0.177g高锰酸钾氧化）。4．伊红0.5~1%水溶液或酒精溶液。1．水溶性伊红伊红5~10g蒸馏水1000ml冰醋酸10滴先将水溶性伊红加入蒸馏水中，用玻璃棒搅起泡沫后过滤，再加冰醋酸。2．醇溶性伊红伊红5~10g70%