石蜡切片制备基本步骤

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1、尸蜡切片制备基本步骤                                      一、准备工作(一)(一)洗涤实验所需器皿:(玻璃器皿的清洗)1、 用洗衣粉将玻璃器皿表里擦洗干净反复洗刷2、 将器皿在自来水下冲洗干净3、 将器皿倒扣在铺有吸水纸或纱布的桌子上控干注:一般情况下,经以上步骤后,用蒸馏水洗过1~3次即可烘干备用,如果做特殊染色还需浸泡在酸性清洁液内12~24小时,再经自来水彻底冲洗,再用蒸馏水过洗1~3次烘干备用。(二)配制:硫酸洗液的配制清洁液(洗液)的配制:成分强酸液次强酸液弱酸液浓硫酸(ml)10

2、00200100重铬酸钾(mg)63120100蒸馏水(ml)2002001000  重铬酸钾1200g蒸馏水2000ml将2000ml浓硫酸缓缓倒入上述溶液中,边倒边用木棒轻轻搅拌(三)载玻片与盖玻片的处理1.       将所需载玻片与盖玻片清洗后,放入硫酸重铬酸钾溶液中浸泡24小时2.       流水冲洗,再用蒸馏水冲洗3遍3.       95%~100%酒精浸泡24小时,用绸布擦干备用注:在将载玻片与盖玻片放入清洁液中时,要一片片地投入,使其不致重叠。二、准备工作(二)常用液体的配制(一)缓冲溶液:1.磷酸盐缓冲液A

3、液:0.1mol/L磷酸二氢钠B液:0.1mol/L磷酸氢二钠A液与B液按比例混合调整到所需的PH值(3:7≈PH7.0)2.枸椽酸缓冲溶液A液:0.1mol/L枸椽酸B液:0.1mol/L枸椽酸钠A液与B液按比例混合调整到所需的PH值(6.2:42.8≈PH6.2)(二)固定剂:1.甲醛:10%甲醛福尔马林100ml蒸馏水900ml注:实际甲醛含量只有3.6~4.0%但习惯上都将其视为10%。2.10%中性福尔马林钙固定液甲醛液10ml蒸馏水90ml加碳酸钙至过饱和(以容器底部碳酸钙沉淀1~2cm厚为适度)充分振荡混合后,放置

4、24小时取上清液使用。3.4%多聚甲醛:8%多聚甲醛多聚甲醛8g蒸馏水100ml加温至60℃左右,不时搅拌,成为乳白色溶液。滴加1NNaOH,并不停搅动至液体清明。1NNaOHlN等于1L溶液中某种物质1mol除以该物质的氢当量价所得数值的量氧化钠(NaOH);分子量=40.005,当量价=11NNa0H的配制方法为:m=40.005/1=40.005g。取40.005gNaOH溶解于1L蒸馏水中4%多聚甲醛8%多聚甲醛50ml0.1M磷酸盐缓冲液50mlPH7.2先取50ml8%多聚甲醛,用0.1M磷酸二氢钠和0.1M磷酸氢二

5、钠将PH值调至7.24.Bouin液:苦味酸饱和水溶液75ml36%~40%福尔马林液25ml冰醋酸5m15.改良Bouin氏固定液苦味酸饱和水溶液45ml95%酒精45ml36%~40%福尔马林液5ml冰醋酸5m16.Carnoy液:冰醋酸10m1氯仿30m1无水乙醇60m1以上三者临用前混合,预冷至4℃后使用。24小时后固定液失效。(三)染色液1.Harris苏木精液A液:苏木精1g无水酒精10mlB液:铵矾或钾矾20g蒸馏水200ml氧化汞0.5ml冰醋酸8ml将矾溶于水,加热溶解(B液),稍冷后将苏木精酒精液(A液)混入

6、B液,加热,稍冷却,加氧化汞,再继续加热1分钟,染液变为紫色,注意在加氧化汞时宜逐渐少量加入,防止染液溅出。全冷后呈深紫色,将烧杯口用纱布盖好,隔夜过滤,在过滤液内每96ml中加4ml冰醋酸,放置1周后成熟,即可用于染色,保存期1~2个月。此染液在加醋酸后,对核染色特具选择性,故很适于脱落细胞的核染色。由于染液内已加有氧化剂,故不能长期储存,但利于配后即用。2.Mayer苏木精掖苏木精1g钾矾或铵矾50g碘酸钠0.2g蒸馏水1000ml水合氯醛50g枸橼酸1g将苏木精,钾矾及碘酸钠依次加入水内,略加热并搅拌,此时液体呈蓝色,待全

7、溶后过夜。再加入水合氯醛及枸橼酸并加热至煮沸5分钟,冷后过滤备用。如不急用可不煮沸而在室温待其成熟,染液可较长期贮存使用。核染色鲜明,染色时间5—10分钟。用该染液染色后,不需分化,充分水洗蓝化后即可,伊红复染细胞质,使用一段时间后就要换新溶液。3.Hasnsen甲矾苏木精的配制A液:苏木精1g无水乙醇10mlB液:钾矾20g蒸馏水200mlC液:高锰酸钾1g蒸馏水16ml三液分别溶化后,将A液倒入B液,再加入C液3ml,充分搅拌均匀后加热至沸腾,1分钟左右,将容器置于冷水中使其迅速冷却,此液配后即可使用,染后无需碱化,细胞核即

8、为蓝色,效果较好,高锰酸钾可以迅速氧化苏木精(每1g苏木精需0.177g高锰酸钾氧化)。4.伊红0.5~1%水溶液或酒精溶液。1.水溶性伊红伊红5~10g蒸馏水1000ml冰醋酸10滴先将水溶性伊红加入蒸馏水中,用玻璃棒搅起泡沫后过滤,再加冰醋酸。2.醇溶性伊红

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