石蜡包埋步骤-使用.doc

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1、石蜡包埋步骤1.取材固定：离体的组织不及时固定，组织就会自溶，抗原就会扩散。固定就是加入一些可以让蛋白质变性的物质（比如说甲醛），使得蛋白质的结构被固定住，不再发生变化，同时也不会再发生一些活性反应，这样才好做后续的染色步骤。常见固定液是4%的多聚甲醛和饱和苦味酸。根据不同目的、组织特征代表性取材。取的材料应该小而薄。便于固定剂迅速渗入内部，一般厚度不超过2mm，大小不超过5×5mm2。每个组织最好多切几块。新鲜组织固定（组织块不宜太大太厚，这样固定液很难进入里面，可能会导致在较短的时间内脱水不完全，引起一系列的问题

2、，比如浸蜡不彻底，切片不好完成，切不完整。导致后来切片染色的脱落，造成染色的失败。组织块也不能太小，否则不能保证切片数量，且透明时间和浸蜡时间不能很好的把握。）固定时间因固定剂种类而异，大多6-12小时，一般不超过12小时。视组织固定的难易程度而定。后续如果做免疫组化，不应超过12小时；后续如果做HE染色，不应超过24小时。固定完之后用水洗（目的：洗去渗入组织的固定液，终止固定以免影响对组织的内结构的观察，分析。换液两次，一次半小时。）之后可直接脱水包埋或放入75%的乙醇4度可长期保存。2.脱水：从75%的乙醇中取出

3、，分别放到80%，90%，100%(Ⅰ)的乙醇中半小时，再放入100%乙醇中15min。固定完直接水洗包埋的，应从70%乙醇开始，易碎组织从50%乙醇开始。组织脱水时间不应过长，尤其是高浓度乙醇，要特别注意控制时间。3.透明：透明的目的是置换组织内的脱水剂，为下一步浸蜡起到桥梁作用，二甲苯可以去除脂肪。乙醇+二甲苯（1:1）2h；二甲苯（Ⅰ），二甲苯（Ⅱ）各10min（根据组织的大小和透明的难易程度不同，透明的时间可以根据具体情况调整。颜色浅的组织表面油亮，可以透过光时效果较好，颜色较深的组织至少边缘可以透光。类似于

4、风干的杏肉。）4.浸蜡：浸蜡目的是置换组织中的透明剂，为包埋作准备。二甲苯+石蜡（1:1）2h；石蜡（Ⅰ）1h；石蜡（Ⅱ）2h.（浸蜡的时间也可以长一些）5.包埋：在冰盒上进行，将融好的纯蜡（最好提前4小时以上开始融蜡，新蜡更难融）倒入蜡盒（可以浸没组织就行，大约蜡盒的三分之一）由于蜡盒底部与冰盒接触，底部的蜡会先凝固，这样就可以把组织用镊子夹住立在底部。然后继续将蜡盒倒满，便于切片机夹住蜡块。待蜡块完全凝固，包埋就完成了。