虾过敏原蛋白纯化中硫酸按沉淀法的改进.docx

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1、虾过敏原蛋白纯化中硫酸按沉淀法的改进张轶群1，林洪*1，李振兴1，吕朋2(1.中国海洋大学食品学院水产品安全性实验室，山东青岛；2.山东出入境检验检疫局，山东青岛)摘要：目的优化虾过敏原蛋白纯化的硫酸钱沉淀工艺，提高纯化效果。方法测定不同饱和度硫酸钱溶液的体积和pH，将过敏原蛋白粉末加入固定饱和度和pH的硫酸钱溶液中沉淀，并用SDS-PAGE方法检测不同硫酸氨浓度下蛋白质组分的变化。结果PH7.5的30%饱和度硫酸氨溶液可有效地分离虾过敏原蛋白，进一步柱层析得到只有一条电泳带的样品。结论通过改进硫酸氨沉淀工艺，可提高虾

2、过敏原蛋白的纯化效果。关键词:虾;过敏原;纯化;硫酸氨沉淀中图分类号:8985.2文献标识码:A文章编号:1672-979x(2008)11-0050-03ImprovementofShrimp(Penaeusvannamei)AllergensPurificationbyAmmoniumSulfatePrecipitationZHANGYi-qun1,LINHong*1,LIZhen-xing1,LVPeng2(1.SeafoodSafetyLab,CollegeofFoodScienceandTechnology,

3、OceanUniversityofChina,Qingdao,China;2.ShandongEntryExitInspectionAndQuarantineBureau,Qingdao,China)Abstract:ObjectiveTooptimizethepurificationtechnologyofshrimpallergensbyammoniumsulfateprecipitationandenhancethepurificationefficiency.MethodsThevolumeandpHvalue

4、ofammoniumsulfatesolutionswithdifferentsaturationweremeasured.ThechangesofproteincompositionsindifferentsolutionsweredeterminedbySDS-PAGEafteraddingtheproteinallergenspowdertoammoniumsulfatesolutionswithdifferentpHvalueandconcentration.Results30%saturationammoni

5、umsulfatesolutionwithpH7.5coulddepositshrimpallergenseffectively.Byafurthergelfiltration,theshrimpallergenscouldbeobtainedwithonlyoneelectrophoresisbandConclusionThepurificationefficiencyofshrimpallergenscanbeenhancedbyimprovingtheprecipitationtechnologyofammoni

6、umsulfate.Keywords:shrimp;allergen;purification;ammoniumsulfateprecipitation近年，过敏疾病正成为一种常见、多发病。流行病学研究显示[1]，约33%的过敏反应由食物诱发，有时甚至造成过敏性休克，严重时可危及生命[2-4]。1999年国际食品法典委员会公布的常见致敏食品清单中，虾类及其制品是主要的过敏食物之一[5]。过敏原J哇质的研究、生物体内化学变化过程的实验室再现以及多种抗体的制备，要求纯度较高的过敏原。获得纯化、单一过敏原组分对研究加工方式对

7、过敏原活性的影响，开发能降低海产品过敏原的食品加工技术具有重要的意义。纯化过敏原还可在临床上明确过敏原类型，提高过敏症诊断的灵敏度。研究表明，虾过敏原是一种相对分子质量约36X103的酸性糖蛋白，属肌肉中的原肌球蛋白困。传统的纯化方法主要是用60%饱和度硫酸氨沉淀，再经过凝胶柱层析、离子交换层析等一系列纯化步骤，方法繁琐。本课题组在研究中改进了传统的方法，获得了较好的结果，提高了纯化率。现以南美白对虾为例，介绍改进后的虾过敏原纯化法，为进一步研究虾过敏原的性质提供物质基础。1材料与仪器1.1材料南美白对虾(Penaeu

8、svannamei，购自青岛南山水产品市场，鲜活品)；优级纯硫酸氨(天津科密欧化学试剂开发中心)；三经甲基氨基甲烷(Tris，生化试剂，青岛福林生物化学公司)；十二烷基硫酸钠（SDS，生化试剂，山东爱博科技贸易公司）。其余试剂为分析纯。1.2仪器DYY一7C型电泳仪(北京六一仪器厂)；Tanon-3500R型凝胶成像及分析系统(上