（果树学专业论文）aba结合蛋白纯化程序的改进

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1、●生里查些查堂一——A毽AABA—BPAcrylAPSBisBi舢1lisBMECAPSCBBR．250DTTEDl’AHPLCLEAPAGEPVPSDSSDS，PAGETEMEDTES英文缩写表abscisicacidABAbindingproteinacrylamideamoniumpersulphateN。N'-methylene—bis—acD,lamidebis[2·hydroxylethyl]iminotris[hydroxylmethyl]methane9-mercaptoethanol3-[cyelohexylarnino]·1一pro

2、panesulfonicacidCoomassieBrilliantBlueR一250dithiothreitolethylenediaminetetra-aceticacidhighperformanceliquidchromatogramlateembryogenesis—abundantpolyacrylamidegelelectrophoresispolyvinylpyrrolidonesodiumdodecylsulfateSDSpolyacrylamidegelelectrophoresisN’N'N’，N'-tetramethyl·eth

3、ylcnendiaminem—tris[hydroxymethyl]methyl一2*aminoethanesulfonieacid●垒蹩蓬叁篓垒鎏釜篓塞墼整鳖中文摘要《腿落酸是～葶孛具蠢薅要生理功能的撼物激索，特别是在植物抗逆及慕实、秘予发鸯中骞豢震要传用。在ABA的碟究中，霄关ABA受俸及ABA缤号传导极粼黪磷究爨最竣·§的闯题n嬲寻找ABA受体豹羲撬蹙寻找ABA．BP。该磺究扶上鲢鳃70年载裁开始，瞧鏊本羔都楚慕瑙配藜褥谌方法瓣ABA绥合强蠢或受俸鹣巢蹙生理、囊纯姆性静分耩，有关ABA．BP静分离没裔蜜成往酌突谖。青拳瀚蹙我帮j实验室褥掰了～种A

4、BA-BP沁—√本实验蘧在哭忠义、赵志新的工作熬础上，，对ABA-BP的提取方法的邀一步探索。吴、赵用EAH*Sepharose。4B偶联ABA，邋过素秘层鸯跬摄取劐一耪ABA．BP。键数量较少，星提取方法隧难。∥搴实验鲢籁熬魑泼逡ABA．BP的提敬方法，默获褥足够的援盆，。”^／f支持嚣净工佟懿开袋。)逶避不嚣魏浓发、不嚣洗裁对鬻，对瑟擀⋯，熬磊步骤洗漩蛋白SDS．PAGE硷溅分耩对院，发现魏ABA。BP辩亲秘栳静结合活力蠲环境溶液静盆离予浓度有密切关系，麓浓度增黼，ABA。BP闷嵇子酌结合力下降，缀翁从柱子中洗脱出来。迸一步实验发现，用50mM魏溶

5、液，l毫升／分钟的流速，洗脱200—300毫舞去除杂蛋自较为会适。盐浓度避毫或洗脱体积太大，都会有ABA．BP洗-F来。盐浓凄《氐或淡脱聪翘缀，会赊不净杂蛋白。本方法扶30宠餐蠹下袭瘦霹提取500徽宠发表翡ABA．BP。经过SDS—PAGE、IEF、}嚣F，SDS—PAGE龟泳泠溅，藏蛋鑫跫美、赵群褥耱鼗骞为溺一蛋鑫。冀分予羹为42KD，等电赢为4。86。关键字：脱落酸；脱落酸结合蛋白；亲和溪祈、一，L一2J生里坐些盔堂AbstractAbscisicacid(ABA)isanimportantphytohormoneplayingavitalrole

6、inenvironmentaladaptationandcariousdevelopmentalprocessesinplants．PurificationofABA—bindingproteinsisthefiststeptoisolatingABA’SreceptorthattriggersthefirsteventsinABAsignalinginplantcells．BasedontheworkofZhongyiWu(1998)andZhixinZhao(2001)，thisexperimentisaimedtoimprovethemethod

7、ofpurificationofABAbindingproteinfrombroadbeanleaves．SDS—-PAGEoftheelutedproteinshowedthattheABA·-BPwaseasytobeelutedfromaffinitycolumninhighconcentrationofNaCl．ThebestwayofremovingotherproteinsfromABA—BPwastousethefollowingelutingbufferandprocedures：200—300ralof50raMNaClbuffera

8、t1ml／min，InSDS—PAGE，IEFandlEF／SDS．PAGE2Delec{ro