生物蛋白纯化论文

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1、江苏农林职业技术学院毕业论文（设计）Cementprotein的转化表达优化与纯化摘要:本实验将含有Cementprotein基因片段的重组载体pColdTF转化入E.coliBL21(DE3)中,在摇瓶培养的条件下，细胞中融合蛋白的含量达到60%以上；然后利用包涵体处理、复性、Ni-IDA亲和层析的方法纯化蛋白。使用2.4L的菌液，经诱导、纯化、复性后大约可以得到10mg的蛋白；同时采用ELISA检测法，证实了纯化的SPG有很高的活性。关键词：融合蛋白的表达；Ni-IDA亲和层析。Abstract:Inthisstudy,co

2、ntainingCementproteinfragmentpColdTFrecombinantvectorwastransformedintoE.coliBL21(DE3),inshakeflaskcultureconditions,cellproteincontentabove60%;Theninclusiontreatment,renaturation,Ni-IDAaffinitychromatographypurifiedprotein.Use2.4Lofbacteria,byinduction,purification,

3、canberefoldedabout10mgofprotein;thesametimebyELISAassay,confirmedthepurificationoftheSPGhashighactivity.Keywords:proteinexpression;Ni-IDAaffinitychromatography.1江苏农林职业技术学院毕业论文（设计）目　　　　录1引言………………………………………………………………12材料及方法…………………………………………………………12.1材料和试剂……………………………………………

4、…………12.1.1菌株与质粒………………………………………………………12.1.2主要试剂………………………………………………………12.1.3主要仪器………………………………………………………12.2方法与步骤………………………………………………………12.2.1重组质粒的转化…………………………………………………12.2.2转化子的筛选与鉴定…………………………………………12.2.3Cementprotein的纯化…………………………………12.2.4ELISA检测活性：………………………………………………13结果与分析

5、………………………………………………………23.1Cementprotein的诱导表达：……………………………………23.2Cementprotein的分离纯化：…………………………………33.3ELISA检测的结果：……………………………………………33.4成品包装…………………………………………………………34结论…………………………………………………………………3参考文献……………………………………………………………3致谢……………………………………………………………………51江苏农林职业技术学院毕业论文（设计）1引言［1

6、］亲和层析的原理是：生物分子间存在很多特异性的相互作用，它们之间都能够专一而可逆的结合，这种结合力就称为亲和力。亲和层析就是通过将具有亲和力的两个分子中一个个固定在不溶性基质上，利用分子间亲和力的特异性和可逆性，对另一个分子进行分离纯化。被固定在基质上的分子称为配体，配体和基质是共价结合的，构成亲和层析的固定相，称为亲和吸附剂。亲和层析时首先选择与待分离的生物大分子有亲和力的物质作为配体，并将配体共价结合在适当的不溶性基质上。将制备的亲和层析剂装柱平衡，当样品溶液通过亲和层析柱的时侯。待分离的生物分子就与配体发生特异性结合，从而

7、留在固定相上；而其它杂质不能与配体结合，仍在流动相中，并随洗脱液流出，这样层析柱中就只有待分离的生物分子。通过适当的洗脱液将其从配体上洗脱下来，就得到了纯化的待分离物质。亲和层析的优点是它分离蛋白经常只需要经过一步处理即可使某种待提纯的蛋白质从很复杂生物蛋白质混合物中分离出来，而且纯度很高。此外蛋白在纯化过程中得到浓缩，结合到亲和配基后，性质更加稳定，其结果提高了活性回收率。它可以减少纯化步骤，缩短纯化时间，对不稳定的蛋白纯化十分有利。1江苏农林职业技术学院毕业论文（设计）2材料2.1材料和试剂2.1.1菌株与质粒大肠杆菌BL2

8、1(DE3),Genscript保藏；表达载体pColdTF，Genscript保藏；pColdTF-Cementprotein，Genscript构建。2.1.2主要试剂Ni-IDA亲和层析凝胶：Genscript生产；LB液体培养基(g/L)：胰蛋白胨(Tr