共聚焦激光扫描（荧光）显微镜ppt课件.ppt

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1、激光扫描共聚焦显微镜(laserscanningconfocalmicroscopeLSCM)是20世纪80年代发展起来的一项具有划时代意义的高科技新产品，是当今世界最先进的细胞生物学分析仪器。激光共聚焦显微镜利用激光作为光源，在传统光学显微镜基础上采用共轭聚焦的原理和装置，以及通过针孔的选择和PMT的收集，并带有一套对其所观察到的对象进行数字图像分析处理的系统软件。与传统光学显微镜相比，它具有更高的分辨率，实现多重荧光的同时观察并可形成清晰的三维图象等优点。所以它问世以来在生物学的研究领域中得到了广泛应用。共

2、聚焦激光扫描（荧光）显微镜共聚焦激光扫描显微镜共聚焦激光扫描显微镜(ConfocalLaserScanningMicroscope,CLSM)是1987年面世并发展起来的一种先进的细胞生物学分析仪器,是一项具有划时代意义的高科技新产品,是近代生物医学图像分析仪器最重要的发展之一,有细胞“CT”之称。成为形态学、分子细胞生物学、神经科学、药理学、遗传学等领域中新一代较有力的研究工具。减少由于光散射产生的图像模糊增加有效分辨率提高信噪比厚标本的清楚细查Z轴扫描可以实现数字放大倍率的调节共聚焦显微镜的优点Fluore

3、scentMicroscopeObjectiveArcLampEmissionFilterExcitationDiaphragmOcularExcitationFilterObjectiveLaserEmissionPinholeExcitationPinholePMTEmissionFilterExcitationFilterConfocalMicroscope原理示意图光源（激光）二色镜。物镜样品针孔检测仪共焦显微镜的最大优点是可以只从一个平面收集光。针孔同焦平面成对（即共焦），使得来自焦平面

4、以外的光远离检测仪。激光扫描显微镜按顺序一点一点地、一行一行地扫描样品，将象素资料合成一个图象。通过移动焦平面，单个图象（光限幅）可以放在一起，形成可以以后进行数字处理的三维栈。激光束分光器组织样品探测器小孔聚焦透镜物镜光学扫描QuarterWavePlate基于共聚焦原理的皮肤在体三维成像技术窗口色素痣AB明亮的黑素细胞巢围绕真皮乳头呈圆形或椭圆形分布，细胞形态规则，大小及明亮度均一。细胞间有间隔。对皮肤疾病的治疗与疗效评估需要先进的皮肤诊断技术无创、原位、动态、即时对可疑皮损部位可进行多次、重复观察提供客

5、观、量化的评估指标皮肤影像学内窥式激光共聚焦显微镜J。Knitrtelet.al.opticscommunications188(2001)267-273横向分辨率为3.1um；轴向分辨率为16.6umInvivofiber-opticconfocalreflectancemicroscopewithaninjection-moldedplasticminiatureobjectivelensFiberedConfocalFluorescenceMicroscopy光学低相干层析成像（OCT）背景生物医学光子学

6、是光学与生命科学相互交叉、相互渗透的一个边缘学科，是关于光辐射与生物组织之间相互作用的学问。光学技术在生物医学中应用由来已久，早在17世纪，光学显微镜的发明将医学研究提高到细胞形态学水平。二十世纪七十年代之后，激光技术已成为临床治疗的有效手段：激光诊断(以激光作为信息载体)激光纤维内窥镜；激光扫描共焦显微镜；激光多普勒血流计；激光光谱诊断技术；激光治疗(以激光作为能量载体)光动力疗法治癌；激光外科手术；准分子激光角膜成形术；等简介进入二十世纪九十年代，由于医学对无辐射损伤、高分辨率层析成像的需求，光学

7、相干层析成像技术（OCT，OpticalCoherenceTomography）孕育而生，并逐渐成为该领域的研究热点。OCT是继超声、X射线、核磁共振等层析成像技术之后，又一种新型的层析成像技术。OCT将激光技术、超灵敏光电探测、精密自动控制和计算机图像处理等多项技术综合为一体。光学相干层析成像（OpticalCoherenceTomography,OCT）作为一种全新的光学层析成像技术，以其无辐射、非侵入、高分辨率及高探测灵敏度等特点，在临床医学领域具有巨大的发展前景。发展历史光学低相干反射测量技术（OLCR

8、）OLCR最早形成于七十年代，它利用低相干光干涉原理测量反射光的幅度和相对相位，从而获取传输介质的内部信息。用途：集成光纤器件的特征或瑕疵检测。1991年，美国的麻省理工学院的J.G.Fujimoto和D.Huang等人成功地开发了光学相干层析成像技术，该技术结合了共焦显微术和低相干光的外差探测技术，通过快速扫描实现二维或三维层析成像。光学相干层析成像技术的优点1)无辐射损伤、非侵