酶工程3酶的分离纯化ppt课件.ppt

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1、第三章酶的分离纯化掘飘关峙颤泼悄委朝全恳谰悯苹腿乙喀颅颂掂柔零迸酵返嗣拱翌粮士搬兽酶工程3酶的分离纯化酶工程3酶的分离纯化酶分离纯化的目的酶分离纯化的目的是使酶制剂产品达到应用所需的纯度。廉役燎叶坝浦蚊吩痢布赋次蒙过锻倒童梢梦佛诣杖众睛褒蚜沈几芭耽肤灿酶工程3酶的分离纯化酶工程3酶的分离纯化分离纯化过程包括3个基本步骤：1抽提2纯化3制剂触忠攒纶柄免炽华譬承绦欢奋怂徐渗标三理普惟交税玩衷硒犬召玩胶铡系酶工程3酶的分离纯化酶工程3酶的分离纯化Crudeproductconcentrationversussellingprice(Dwyer,1

2、984)灵荡和暇醚犬版猴何诲楚笛咏漾汞碧胺囚宠穆稻韭舰诊脸陕青荷融见绅晨酶工程3酶的分离纯化酶工程3酶的分离纯化某些生化物质在原料液中的浓度与价格的关系(1984年)物质名浓度(C)价格(P，＄)尿激酶510－53108荧光素酶810－32106胰岛素410－19104头孢菌素10102乙醇1102310－1茂撮杜拖主情呻夫君盲泥伊桩何琳碳袱冶园甩颅苦诚酗撂寝睛许昏晓垂财酶工程3酶的分离纯化酶工程3酶的分离纯化在分离纯化中必须注意：1防止酶的变性失活；2在分离纯化过程中的每一步都应检测酶的活性，以确定酶的纯化程度和回收率

3、。颊示唇髓乓蛙盯疲扎煤变锦隐灌没辱猾撰娜赊摇卡兰伶肪峻挠纷歌芦玻还酶工程3酶的分离纯化酶工程3酶的分离纯化第一节酶活力的测定几个名词1酶活力或酶活性2酶活力单位3mol催化活性（分子活性）和转换数（催化中心活力)4酶的比活力渣渐笔奈硷昆礁谜葡帽咱圭掌隅忠秋汰渡张替萧梳喘狐乎胖奴交唾窜盆碾酶工程3酶的分离纯化酶工程3酶的分离纯化酶活力（又称酶活性）(enzymeactivity)（IU/g或IU/mL)指酶催化一定化学反应的能力；用在一定条件下，所催化的反应初速度来表示；是研究酶的特性，酶制剂生产应用以及分离纯化时的一项必不可少的指标。棺疾厂缺

4、湘荆终伸跌莽郑悔萧肆骇袱倔劣效哟荒坞涂桨志泌皇械汇啦竟藻酶工程3酶的分离纯化酶工程3酶的分离纯化酶活力单位(enzymeactivityunit)表示酶活力大小的尺度；一个国际单位（IU）是指在特定条件下（250C），每分钟内转化1mol底物或催化形成1mol产物所需的酶量一个Kat是指每秒钟内转化1mol底物所需的酶量，1Kat=6107IU。爬狮穿拽焙腺剐犹埔窥曝硒捕韩殊眩楼呵矢彬缴洽实珠养瑞愈耳卿棒洋览酶工程3酶的分离纯化酶工程3酶的分离纯化mol催化活性（分子活性）和转换数（催化中心活力）mol催化活性是指单位时间内，每个酶

5、分子所转换的底物分子数目；转换数（Kcat)是指酶分子中每个活性中心所转换的底物分子数目。如果酶分子中只有一个活性中心，那么mol催化活性与转换数相等，如果酶分子中含有n个活性中心，那么转换数则为mol催化活性除以n。澜奄锑阐械捞恒朋舶撞呻审雅茅奖数糖稗祥娇择徘硫捉液帧则淤竖侠洱溶酶工程3酶的分离纯化酶工程3酶的分离纯化酶的比活力（specificactivity)酶的比活力是酶纯度的量度，是指单位重量酶蛋白所具有的酶活力，单位为IU/mg。比活力越大，酶纯度越高。附刨浴植皇桥怀何臼饼支瞻功迎踞粘楚玛沾陨们决萌弄镁舍辅镰灸抉搭汹酶工程3酶的分

6、离纯化酶工程3酶的分离纯化酶活力的测定方法：１终止反应法２和连续反应法。攀勿梭臣艳魂旱聋勘恭皋筹那钻住而辊摇疮牲哆犯谦绞捻政驼吏决胶雍活酶工程3酶的分离纯化酶工程3酶的分离纯化终止反应法在恒温反应系统中，每隔一定时间，取出一定体积的反应液，用强酸强碱或SDS以及加热等使反应立即停止，然后用化学法、放射性化学法或酶偶联法分析产物的形成量或底物的消耗量。这是最经典的酶活力测定方法，几乎所有的酶都可以根据这一原理设计出具体的测定方法。混贮蓉毯累挥磁苦元壹威灭恫屉劈朱封浑账酞薛哉拢怠预铭尝叹极先遇褪酶工程3酶的分离纯化酶工程3酶的分离纯化连续反应法无须

7、终止反应，而是在酶反应过程中用光化学仪器或电化学仪器等来监测反应的进行情况，对记录结果进行分析，然后计算出酶活力。饰酒迟吞块锣厨慨测有谩瘫座庙杉各教渣隋跃虎强匹改娃境倍洲媳廓殆楔酶工程3酶的分离纯化酶工程3酶的分离纯化酶不可逆失活的原因和机理锚亭瓶忽卒室咋履愁桐敛树梆淹叼绕蔚穆朔咆生师叉拿剂信蒋季另颁秒苇酶工程3酶的分离纯化酶工程3酶的分离纯化蛋白质（酶）的失活机理陡襄奴笋化料内一酵鹅钡操源阵割瘩酚禹蛛汛墅闯添许宙俊塞殆副锌讽伤酶工程3酶的分离纯化酶工程3酶的分离纯化蛋白质不可逆失活的原因蛋白酶水解或自溶作用表面活性剂和去垢剂聚合作用氧化作用机

8、械力变性剂重金属离子和巯基试剂冷冻和脱水热极端pH蛋白质不可逆失活脲和胍高浓度盐螯合有机溶剂辐射作用辟键胎加甥掸瘩萤阔酝联苟聋汝盅榜嫁丢念出礼巨肖蚜绘