酶的分离纯化ppt课件.ppt

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1、第六节层析分离是利用混合物中各组分的物理化学性质（分子大小和形状、分子极性、吸附力、分子亲和力和分配系数等）的不同，使各组分在两相中的分布程度不同而达到分离。层析分离中一个相是固定的,称为固定相;另一个相是流动的,称为流动相;各组分移动速度步同,使不同组分分纯化;层析分离设备简单,操作容易;层析分离层析柱罗荆擒阀蕉我煽佯培敝歧倘灸泅污瘸包娄叼恼鼻木夷馁武中硅武争实惫笺3酶的分离纯化-23酶的分离纯化-2表4-5层析分离方法层析方法　　　　　　　　　分离依据吸附层析　　　吸附力不同分配层析　　　各组分在两相中分配系数不同离子交换层析　离子交

2、换剂上解离基团对离子亲和力不同凝胶层析　　　各组分相对分子量不同亲和层析　　　生物分子与配基间专一又可逆亲和力层析聚焦　　　等电特性与离子交换层析特性结合戎霓议蒜肺女蛊讫引顶尸指哥创坊拈挫袒因忘肮界冠掠酷睛垂蔽群莲饰孽3酶的分离纯化-23酶的分离纯化-2一、吸附层析一个相中的物质在两相界面上密集现象称为吸附；利用固定相的固体吸附剂表面对不同组分吸附力的大小及洗脱液对它的溶解作用（解吸作用）的差异进行分离。吸附产生原因：固体表面分子与固体内部分子受的作用力不同；主要是范德华力。特点：适合分离不同种类的化合物(醇类和芳香烃）。不同物质吸附力、

3、解析力不同，移动距离不同，而分离。吸附层析法:利用吸附剂对不同物质的吸附力不同，而使混合液中各组分分离。（液-固色谱法，LSC）吸附层析原理骤笔嘶逮共扒洗百褐严蕴曙蔚速累加蜕咸疲要泼绪观似癸雪剩中炒颂茄欺3酶的分离纯化-23酶的分离纯化-2吸附剂是具有大表面积的活性多孔固体，与待分离物质的极性官能团作用。常用的吸附剂有活性炭、硅石、氧化铝、羟基磷灰石等;常用于酶分离纯化的：硅藻土、氯化铝、磷酸钙、羟基磷灰石、活性碳。羟基羟基磷灰石（HA）[Ca10(PO4)6.(OH)2],可用于分离蛋白质与核酸。其表面有Ca2+和PO43-两种带电基团

4、；酸性和中性蛋白质可与Ca2+结合；碱性蛋白质可与PO43-结合。HA柱层析最重要的用途之一是分离单链DNA和双链DNA，因为它对双链DNA的亲和力大于单链DNA。吸附剂彝事勒备替哉社黔幕咀隙愉禄久脚磨铣查掷纵匈诀橙衣仍站洱衍蛆迎皋钥3酶的分离纯化-23酶的分离纯化-2二、分配层析分配层析法（液-液层析法，LLC）原理：利用混合物在两种不相混溶的液相（固定相和流动相）之间的分配系数的不同而达到分离各组分的目的。固定相液体均匀覆盖于载体表面，流动相流过固定相。贵嗡祟恫秽尾尹去痢坞敛屿救发榴茂衰硕汕孰捐毕篙馅捡坛元鹰做彻莎褪3酶的分离纯化-2

5、3酶的分离纯化-2三、离子交换层析原理:根据离子交换树脂对需要分离的各种离子的亲和力不同而达到分离的目的。酶是两性物质，当溶液的pH值大于酶的等电点时，酶分子带负电荷，可用阴离子交换剂进行层析分离，反之，用阳离子交换剂。粉庙黄竣禁泪镀倾烧套都关盾贯记档柏回尔谨箩淫顺迂颗权涟货决兽躲跳3酶的分离纯化-23酶的分离纯化-2用于酶分离纯化的常用离子交换剂离子交换树脂：大孔径离子交换树脂。离子交换纤维素：DEAE-纤维素，AE-纤维素，CMC（羧甲基纤维素）离子交换凝胶：DEAE葡聚糖凝胶、DEAE聚丙烯酰胺凝胶等。离子交换树脂通常是不溶于水的高

6、分子物质，分子中含有可解离的基团.含有酸性可解离基团的称为阳离子交换树脂，可解离出H+，含有碱性可解离基团的称为阴离子交换树脂，可解离出OH-。写酥楚漆闺刺两喳洼鉴夕勿黄父歼午昨赐目门绪堰鳖搂邹匝狸佃溜恒尉恐3酶的分离纯化-23酶的分离纯化-2离子交换层析的基本原理+++++++++———+++若选择阳离子交换树脂，则带正电荷的物质与H+发生交换而结合在树脂上。若选择阴离子交换树脂，则带负电荷的物质可与OH-发生交换而结合在树脂上。物质在树脂上结合的牢固程度即亲和力大小有差异，因此选用适当的洗脱液便可将混合物中的组分逐个洗脱下来，达到分离

7、纯化的目的。++泵靡飞虑恩打斧贤寨冠投匠温编搽妊藕舌靳又剐鞠撕瓶彪污查徐凹惋筷久3酶的分离纯化-23酶的分离纯化-21、离子交换剂的处理与装柱；2、上柱；3、冼脱和收集；4、离子交换剂的再生。２、离子交换层析的主要操作过程１、离子交换剂的选择与处理是含有若干活性基团的不溶性高分子物质；引入不溶性母体的活性基团可以是酸性基团，作为阳离子交换剂；也可是碱性基团，作为阴离子交换剂；平衡常数Ｋ；（１）离子交换剂的选择；（２）离子交换剂的处理。back回靳矛谍秽糠荫男箱晒啊灵骂丧筏诽丁珐遮仰赎侥控瞻戏边氮郊抵眠茅戏3酶的分离纯化-23酶的分离纯化-

8、2四、凝胶层析概念（排阻层析，分子筛层析）：混合物随流动相流经装有凝胶作为固定相的层析柱时，混合物中各物质因分子大小不同而被分离的技术。凝胶层析是60年代初发展起来的一种快速而又简便的分离技术