行业标准：DB37T 3989-2020 禽源沙门氏菌快速检测技术.pdf

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1、ICS65.020.30B41DB37山东省地方标准DB37/T3989—2020禽源沙门氏菌快速检测技术RapiddetectionmethodforavianSalmonella2020-06-08发布2020-07-08实施山东省市场监督管理局发布DB37/T3989—2020前言本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。本标准由山东省畜牧兽医局提出并组织实施。本标准由山东省畜牧业标准化技术委员会归口。本标准主要起草单位：山东农业大学、济南百准生物检验有限公司、泰安市动物疫病预防控制中心。本标准主要起草人：孙淑

2、红、朱琦、郭龙宗、唐德宏、王方昆、唐辉、张富友、鞠孜敬、崔治中。IDB37/T3989—2020引言沙门氏菌病是由沙门氏菌所引起的急性或慢性疾病的总称。由鸡白痢沙门氏菌所引起的称为鸡白痢，由鸡伤寒沙门氏菌引起的称为禽伤寒，由其他有鞭毛能运动的沙门氏菌所引起的禽类疾病则统称为禽副伤寒。禽沙门氏菌病在世界各地普遍存在，对养禽业的危害性很大。该病同样严重危害我国的养禽业。可垂直传播和水平传播，造成种蛋孵化率、雏鸡成活率和鸡群生产性能下降等问题。当前，我国种鸡场主要流行的沙门氏菌血清型是B群和D群沙门氏菌。种禽的净化是防控该病最为有

3、效的方法，国家为此制定了相关的检测标准，颁布了GB4789.4—2016沙门氏菌检验方法，但该标准缺少简便、快速的病原学PCR检测方法和血清学ELISA检测方法，鉴于此，特制定本标准。IIDB37/T3989—2020禽源沙门氏菌快速检测技术1范围本标准规定了禽源沙门氏菌鉴别培养和PCR检测技术以及种鸡场主要流行沙门氏菌（B群和D群沙门氏菌属）血清学ELISA检测技术。本标准适用于各种禽类携带沙门氏菌的检疫、诊断、监测和流行病学调查，也可用于规模化种鸡场中沙门氏菌病的净化。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的

4、。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB4789.4—2016食品安全国家标准食品微生物学检验沙门氏菌检验GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T19495.2转基因产品检测实验室技术要求GB/T27401实验室质量控制规范动物检疫NY/T541—2016兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范3试剂和材料3.1除另有规定外，所用化学试剂均为分析纯。实验所用水均符合GB/T6682二级水的规定，实验中人员配置、实验室管理、仪器设备使

5、用、样品实验试剂和废弃物处理等均符合GB/T27401的规定。3.2LB液体培养基（见附录A.1）。3.3BPW前增菌液（见附录A.2）。3.4SC增菌液（见附录A.3）。3.5TTB增菌液（见附录A.4）。3.6XLD鉴别培养基（见附录A.5）。3.7电泳缓冲液（见附录A.6）。3.8阳性对照选择鸡白痢沙门氏菌（CVCC535）、肠炎沙门氏菌（CVCC3377）作为阳性对照。3.9阴性对照选择不含DNA模板的灭菌超纯水。3.10沙门氏菌（B群和D群沙门氏菌属）ELISA检测试剂盒。4仪器设备4.14℃普通冰箱（温控范围2℃

6、～8℃）。4.2生化培养箱（温度范围：5℃～50℃，温度均匀度：≤±1℃）。4.3二级生物安全柜。4.4PCR仪。1DB37/T3989—20204.5电泳仪（电压90V～120V）。4.6控温摇床（温度范围：5℃～50℃）。4.7凝胶成像仪。4.8高压灭菌锅（灭菌温度：105℃～135℃；工作压力：≤0.35MPa）。4.9振荡器。4.10电子天平（感量0.001）。4.11单道微量移液器（2μL、20μL、200μL、1000μL）。4.128或12道微量移液器（10μL）与配套吸头。4.13酶标仪。5样品采集、储存及运

7、输5.1按NY/T541—2016规定进行采样。无菌操作采集疑似沙门氏菌感染禽类的粪便、脏器（匀浆）或肛拭子等，编号。5.2样品采集和样品处理应戴一次性手套，不得交叉污染。5.3采集的样品储存和运输，按照NY/T541—2016规定进行。6鉴别培养和PCR检测方法本实验具体实验操作符合GB/T19495.2转基因产品检测实验室技术要求，样品增菌培养方案按照GB4789.4—2016执行。6.1鉴别培养6.1.1按体积1:9比例，取粪便、脏器0.5g或肛拭子等加入到4.5mL的BPW前增菌液试管中，置于37℃摇床中，220rp

8、m培养10h～12h。6.1.2取培养后的前增菌液500μL分别加入到4.5mLSC和TTB增菌液中，置于37℃摇床中，220rpm培养18h～24h。6.1.3接种针蘸取培养后的SC和TTB增菌液，以“之”字形划线于XLD鉴别培养基平板，置于37℃培养箱中，培养24h～48h。6.1.4