行业标准：DB37T 3985-2020 鸡沙门氏菌的胶体金试纸条检测技术规程.pdf

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1、ICS65.020.30B41DB37山东省地方标准DB37/T3985—2020鸡沙门氏菌的胶体金试纸条检测技术规程TechnicalcodeofcolloidalgoldteststripforAvianSalmonelladetection2020-06-08发布2020-07-08实施山东省市场监督管理局发布DB37/T3985—2020前言本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。本标准由山东省畜牧兽医局提出并组织实施。本标准由山东省畜牧业标准化技术委员会归口。本标准主要起草单位：泰安市动

2、物疫病预防控制中心、山东农业大学。本标准主要起草人：唐德宏、孙淑红、王方昆、唐辉、孙建华、王莉莉、鞠孜敬、张富友、伊惠、樊丽。IDB37/T3985—2020引言沙门氏菌在自然界分布广泛，能侵害人和动物，是一种常见的人畜共患病原，在医学、兽医学和公共卫生学中占有重要地位。传统沙门氏菌的检测方法耗时长，操作步骤繁琐，技术难度大，家禽养殖业和相关检测机构难以对鸡沙门氏菌病做到准确实时监控。本项目拟根据对国内多种血清型、多种来源沙门氏菌检测的基础上，建立本检测技术规程。本标准将规定用两步增菌法对疑似沙门氏菌感染样

3、品进行增菌后，再使用胶体金试纸条进行快速检测的技术（30h内完成）。本标准适用于鸡群中携带沙门氏菌的检疫、流行病学调查、也可用于规模化种禽场沙门氏菌病的净化。IIDB37/T3985—2020鸡沙门氏菌的胶体金试纸条检测技术规程1范围本标准规定了鸡沙门氏菌快速检测技术。本标准规定用两步增菌法对疑似沙门氏菌感染样品进行增菌后，再使用胶体金试纸条进行快速检测的技术。本标准适用于沙门氏菌的检疫、诊断、监测和流行病学调查，也可用于规模化种禽场中沙门氏菌的净化。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡

4、是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T27401实验室质量控制规范动物检疫GB/T19495.2转基因产品检测实验室技术要求NY/T541—2016兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范GB4789.4—2016食品安全国家标准食品微生物学检验沙门氏菌检验3试剂或材料3.1除另有规定外，所用化学试剂均为分析纯。实验所用水均符合GB/T6682二级水的规定。实验中人员配置、实验室管

5、理、仪器设备使用、样品实验试剂和废弃物处理等均符合GB/T27401的规定。3.2BPW增菌液（参见附录A.1）。3.3SC增菌液（参见附录A.2）。3.4TTB增菌液（参见附录A.3）。3.5鸡白痢沙门氏菌（CVCC535）和肠炎沙门氏菌（CVCC3377）作为阳性对照。3.6灭菌水为阴性对照。3.7沙门氏菌胶体金试纸条。3.8营养肉汤均质袋。4仪器设备4.1冰箱（0℃～8℃）。4.2生化培养箱（温度范围：5℃～50℃，温度均匀度：≤±1℃）。4.3二级生物安全柜。4.4控温摇床（温度范围：5℃～50℃）

6、。4.5高压灭菌锅（工作压力：≤0.35MPa，工作温度：≤142℃）。4.6组织研磨仪（干磨、湿磨及冷冻研磨均可）。1DB37/T3985—20204.7电子天平（感量0.001）。4.8微量移液器（量程50μL～200μL、300μL～1000μL）。5沙门氏菌快速检测方法整个实验操作严格按照GB/T27401、GB/T19495.2和GB4789.4—2016要求执行。5.1样品采集、运输和储存取约0.5g样品（新鲜粪便或肝脏等组织）或500μL卵黄囊液到均质袋中，置于2℃～8℃保存，迅速送实验室待检

7、，运输或储存需低温冷藏。参见NY/T541—2016。5.2样品处理往均质袋中加入4.5mLBPW增菌培养基，放入均质器中均质2min。整个过程无菌操作。肝脏等实质性组织样本需经组织研磨仪处理备用。5.3培养过程5.3.1BPW增菌培养置于37℃摇床中，220rpm培养8h～12h。5.3.2取培养后的增菌液500μL分别加入到4.5mLSC和TTB增菌液中，置于37℃摇床中，220rpm培养18h～24h。6胶体金试纸条检测将5.3.2的培养物混合均匀，取1mL到离心管内，盖严盖子，置于沸水（100℃）中

8、加热10min，后冷却至室温，摇匀，滴加3～4滴（约100μL）至胶体金试纸条的样本孔，反应5min～15min，判读结果，超过30min显色无效。鸡白痢沙门氏菌（CVCC535）和肠炎沙门氏菌（CVCC3377）作为阳性对照。参见附录B。7判断标准7.1试验成立标准30min内，C线和T线同时显色或者只有C线显色，则反应成立。若C线不显色，则测试失败或检测卡失效，为无效反应。7.2结果判定阳性反应：若C、T线均