沙门氏菌快速检测技术概述.doc

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1、沙门氏菌快速检测技术概述　　摘要：沙门氏菌是一种能引起人和多种动物肠道感染的重要人畜共患的病原菌。简要介绍了近年来沙门氏菌快速检测技术研究进展，并分析各种检测方法的优缺点，以期寻找一种快速、简便、特异、灵敏，能检测绝大多数血清型沙门氏菌的方法。　　关键词：沙门氏菌；免疫学技术；分子生物学技术；联合检测技术　　中图分类号：Ｓ８５１．３４；Ｓ８５２．６１＋５文献标识码：Ａ文章编号：0439－８11402－0226-04　　　　ＳｕｍｍａｒｙｏｆｔｈｅＲａｐｉｄＤｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆＳａｌｍｏｎｅｌｌａ　　　　ＫＵＡＮＧＬｉａｎｇ－ｄｅ１，ＺＨＵ

2、Ｘｉａｏ－ｘｉａ２，ＸＩＥＸｉａｏ－ｈｏｎｇ１，ＹＩＪｕｎ１，ＬＥＩＭｉｎ１，ＲＥＮＹｏｎｇ－ｊｕｎ１，　　ＧＵＯＺｈｉ－ｑｉａｎｇ１，ＬＩＣｏｎｇ－ｙａｎ１，ＺＨＥＮＪｉｅ１　　　　　　Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａｉｓａｎｉｍｐｏｒｔａｎｔｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｂａｃｔｅｒｉｕｍｏｆｚｏｏｎｏｓｉｓｔｈａｔｃａｎｃａｕｓｅｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｉｎｆｅｃｔｉｏｎｉｎbothｈｕｍａｎｓａｎｄａｎｉｍａｌｓ．Ｔｈｉｓｒｅｖｉｅｗｂｒｉｅｆｌｙｉｎｔｒｏｄｕｃｅｄｒｅｓｅａｒｃｈｐｒｏｇｒｅｓｓofｔｈｅｒａｐｉｄｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆ

3、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａｉｎｒｅｃｅｎｔｙｅａｒｓａｎｄａｎａｌｙzedｔｈｅａｄｖａｎｔａｇｅｓａｎｄｄｉｓａｄｖａｎｔａｇｅｓｏｆｖａｒｉｏｕｓｄｅｔｅｃｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄｓ，hｏｐｉｎｇｔｏｆｉｎｄａｆａｓｔ，ｓｉｍｐｌｅ，ｓｐｅｃｉｆｉｃandｓｅｎｓｉｔｉｖｅｍｅｔｈｏｄthatcouldｄｅｔｅｃｔｔｈｅｍａｊｏｒｉｔｙｓｅｒｏｔｙｐｅｓｏｆＳａｌｍｏｎｅｌｌａ．　　Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ；iｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ；ｍｏｌｅｃｕｌａｒｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ；ｊｏｉｎｔｄｅｔｅ

4、ｃｔｉｏｎｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ　　　　沙门氏菌是一种寄生于人和动物肠道内的无芽孢的杆菌，是肠杆菌科中一种重要的人畜共患病原菌。由于绝大多数沙门氏菌对人和动物都有致病性，能引起人和多种动物的肠道感染，是污染禽肉、禽蛋等动物性食品的主要病原菌，常引起人食物中毒。因此对沙门氏菌的检测在医学、兽医学和公共卫生学上都有十分重要意义。目前沙门氏菌的检测仍沿用传统的细菌培养、生化反应、血清学实验的方法，不仅费时费力，还相当繁琐。同时由于某些生化试剂、血清等质量不稳定、特异性不好等因素，经常给鉴定结果带来差异，难以适应快速检测的要求。因此，传统的沙门氏菌分

5、离培养方法对于大量样本的检测来说，是食品、卫生以及兽医部门实验室的一种沉重负担，而且不能满足日益发展的国际贸易的需要。快速检测方法除带来检验工作本身的革新外，更重要的是由此而产生的社会效益，如减少样本库存费用、减少污染等。　　１免疫学技术　　免疫学技术以抗原和抗体的特异性结合反应为基础，通过病原体刺激机体产生免疫球蛋白，再辅以免疫放大技术来进行检测。抗原和抗体的结合反应可在很短时间内完成，同时由于敏感的标记技术及示踪技术的应用，使得沙门氏菌可在较短的时间内超微量而特异地检出。　　１．１免疫荧光技术　　免疫荧光技术是利用荧光素标记已知抗原，与

6、特异抗体结合后产生荧光的原理。免疫荧光技术主要有直接法和间接法。直接法是在检测样品上直接滴加已知特异性荧光标记的抗血清，经洗涤后在荧光显微镜下观察结果。直接法还可以清楚地观察抗原并用于定位标记观察。孙洋等［1］利用吖啶橙标记免疫血清，用吖啶橙免疫荧光菌团培养法检测沙门氏菌，证明该检测方法对于３４ｃｆｕ／ｍＬ的沙门氏菌均可检出，与枯草杆菌、大肠埃希氏杆菌等８种杂菌均不形成菌团交叉，与杂菌的浓度比在１∶６４０之内均不受干扰。Ｃｌｏａｋ等利用表面吸附将检测样品吸附于载于玻璃表面的一种薄膜上，然后用免疫荧光显微镜进行结果判定，该方法检测限为１０３~

7、105ｃｆｕ／ｍＬ沙门氏菌，且不呈现假阴性与假阳性反应。间接免疫荧光法在实践中用途较广，是在检样上滴加已知的细菌特异性抗体，待作用后经洗涤，再加入荧光标记的第二抗体，一抗与结合有荧光色素的二抗结合，所发出的荧光可由免疫荧光显微进行检测。　　１．２酶联免疫吸附技术　　酶联免疫吸附技术是建立在免疫酶基础上的一种新型免疫测定技术，具有特异性强、敏感性高等优点，可以在短时间内准确地将有害微生物检测出来。其基本原理是把抗原预先结合在某种固相载体表面，然后加入受检样品和酶标抗原，使其与结合在固相载体上的抗原发生反应，形成抗原抗体复合物，经洗涤去除反应液

8、中其他物质，加入酶反应底物后，底物被固相载体上的酶催化变为有色产物，颜色反应的深浅与样品中相应抗体或抗原的量呈正相关。故可根据呈色的深浅进行定性分析或通过酶标仪进行定量测定。由于