实时定量pcr引物tm值和溶解曲线横坐标的tm是一回事么.doc

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1、实时定量pcr引物tm值和溶解曲线横坐标的tm是一回事么TM是当50％的引物和互补序列表现为双链DNA分子时的温度。Tm对于设定PCR退火温度是必需的。Tm可采用下列公式计算：Tm＝2(A+T)+4(G+C)。不一样的，引物的Tm是引物本身的解链温度，软件一般会自动给出。溶解曲线横坐标的Tm是PCR产物的解链温度，所以一般是比引物本身的Tm值大的。就是说你的反应体系在80度时50%的DNA解链啊。因为你用的模版应该的都是一种或者亲缘关系较近的生物的，所以基本上都是这个值。不同生物的基因组的Tm值是不一样的。不一样，你用的是

2、什么方法啊？染料还是探针啊？如果是单独合成的引物，那就是引物的Tm，这个就是你设计引物时软件上给你的Tm。方便你设计反应体系的退火温度。一般情况下，这个值也只是个参考值，要想获得好的结果是需要摸条件的。分子就是烧钱的货，不要怕花钱哈……ps.定量要的是曲线，所以退火温度什么倒不是主要的，主要的是你引物的特异性，千万不能有杂带。先跑个常规pcr看看比较好