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时间：2020-09-07
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1、实验三、大肠杆菌感受态细胞的制备辛德东10-317，675503实验目的实验原理实验仪器材料实验步骤实验结果讨论实验目的学习CaCl2法制备大肠杆菌感受态细胞原理生理状况下，细菌质粒可通过接合(Conjugation)、转导(Transduction)、方式转入到另外的细菌。实验条件下，细菌如果能吸收周围环境中的DNA，必须使细菌具备一个特殊的状态——感受态（competent）。DNA是亲水性分子，不容易穿过细菌的细胞膜。可以让细菌悬在0℃，CaCl2低渗溶液中，这样细胞膜胀成球形，丢失部分膜蛋白，成为容易吸收外源DNA
2、的细胞——感受态细胞(Compenentcells)。一：受体菌的培养从LB平板上挑取新活化的E.coliDH5α单菌落,接种于3-5mlLB液体培养基中,37℃下振荡培养12小时左右,直至对数生长后期。将该菌悬液以1:100-1:50的比例接种于50mlLB液体培养基中,37℃振荡培养2-3小时至OD600＝0.5左右。二：感受态细胞制备1001:将培养液转入EP管，冰上放置20min2:4℃离心5min，4000rpm，弃上清3:加入0.75ml预冷的CaCl2，冰上放置30min4:4℃离心5min，4000rpm，
3、弃上清5:加入0.75ml预冷的CaCl2，悬浮细胞，放4℃保存实验仪器和试剂实验仪器恒温摇床超净工作台冷冻离心机实验试剂大肠杆菌DH5αLB液体培养基0.1mol/lCaCl2溶液实验注意事项细胞一旦离开培养基，实验操作要轻柔（加液，悬浮细胞），以免造成菌体破裂，影响转化整个实验过程中注意将细胞置于冰上
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