乙型肝炎病毒DNA定量检测临床应用的若干问题与思考-论文.pdf

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1、中华传染病杂志2014年6月第32卷第6期ChinJIn{ectDis，June2014，Vo1．32，No．6·专论·乙型肝炎病毒DNA定量检测临床应用的若干问题与思考赵克开缪晓辉HBVDNA检测技术目前已经在临床中普遍HBVDNA时，采用的是全自动的HBVDNA提取应用。但在实际工作中，不少临床医师对如何认识、系统COBASAmpliPrep，且采用的是磁珠吸附柱纯评价和使用HBVDNA检测结果仍存在着一些困化，尽可能地避免了提取过程中HBVDNA的丢惑，甚至可能因认识不足、应用不当导致了错误的诊失，而国产试剂盒均采用

2、手工提取，且多为煮沸法、断和治疗。现就HBVDNA定量检测临床应用的Chelex树脂法等，提取过程中HBVDNA丢失较基因诊断和临床治疗研究阐述如下。多。有学者研究发现，即使采用同一检测试剂，血清一、如何正确认识和评价HBVDNA定量检测标本的处理方法对HBVDNA检测结果也有着直试剂盒的灵敏度接的影响，煮沸法和Chelex树脂法阳性检出率仅为任何一种基因检测技术都有一定的灵敏度，即吸附柱核酸纯化法的52．78和55．56。在阳性该方法的最低检测限。目前公认的HBVDNA定标本中，同一标本的定量值也较吸附柱核酸纯化法量检测

3、国际“金标准”是罗氏公司生产的COBAS低1～2lg拷贝／mLl4]。②该系统用于检测的每份AmpliPrep—COBASTaqMan(CAP—CTM)实时荧光血清标本量较大。CAP—CTM试剂盒用于检测的每PCRHBVDNA定量检测试剂盒，其血清HBV份血清量达650L，而国产HBVDNA检测试剂盒DNA检测灵敏度为170拷贝／mL(30IU／mL)口]。用于检测的血清标本量一般仅为5O～100肚L，但两有学者将雅培公司生产的HBVDNA定量检测试者提取到的待测HBVDNA产物容积一般均为剂盒与CAP—CTM进行了比较，

4、发现两者灵敏度相50L。而且，由于反应管体积的限制，进行PCR检似。测时只能再取其中的2～5“L的HBVDNA提取目前，国产的HBVDNA实时荧光PCR定量产物作为PCR检测的模板。在血清HBVDNA含检测试剂盒灵敏度为1×1O。拷贝／mL，与国外产品量较低时(1×1O。拷贝／mL以下)，在有限的2～尚有一定差距。虽然某些国产试剂盒声称检测灵敏5LHBVDNA提取产物中，能“抓到”多少HBV度可达250或300拷贝／mL，但无充分实验室或临DNA分子进入到PCR检测反应管，并被仪器“捕床证据。有研究显示，将24份罗氏公司第

5、一代产品捉”到荧光信号，就存在着一个概率问题：进入检测20BASAmplicor试剂盒HBVDNA定量在300～体系的血清标本量越多，“抓到”足够多的HBV1000拷贝／mL的患者血清，分别采用2个国产DNA分子的概率就越大，荧光仪捕捉到荧光信号的HBVDNA试剂盒进行检测，发现后者的漏检例数概率也就越高；反之，血清标本量越少，检出概率越分别达11例(45．83)和22例(91．67)E33。低，漏检率也就越高。显而易见，罗氏试剂盒由于增与国产试剂盒相比，罗氏公司的CAP—CTM检加了进入检测体系的样品容积，其敏感度理论上

6、就测系统之所以具有较高的灵敏度，除试剂本身的质比国产试剂盒提高6～13倍。量及配套的仪器性能等因素外，从技术层面看，尚有国产HBVDNA定量检测试剂盒的灵敏度偏其他重要原因：①该检测系统在从血清中分离、提取低可以解释某些临床现象：①CHB或乙型肝炎肝硬化患者多次检测血清HBVDNA％1×10。拷贝／mL，DOI：10．3760／cma．j．issn．1000—6680．2014．06．001在除外合并脂肪肝、药物性肝损害等其他病因后，仍基金项目：艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治专项——病反复出现血清ALT、AST升高；②

7、或在接受抗病毒毒性肝炎转归预警预测的研究(2O12zX1ooO2()O7)治疗后，监测血清HBVDNA已长时间处于不可测作者单位：264200山东省威海市，解放军第四0四医院感染病科(赵克开)；上海长征医院感染科(缪晓辉)水平以下，但血清ALT和AST即使加用“降酶药”通信作者：缪晓辉，Email：xhmiaosh@163．0om后仍持续异常。其中的原因可能就是患者体内存在中华传染病杂志2014年6月第32卷第6期ChinJInfectDis，June2014，Vo1．32，No．6低水平的HBV复制，但国产试剂盒却未能检

8、测出。1×10IU／mL[。根据作者多年的基因实验室和鉴于我国大多数乙型肝炎患者的经济承受能力临床工作经验，多数国产试剂盒的线性范围在1×有限，没有必要普遍推广使用高灵敏度、高成本的进10。～1×10。拷贝／mL，虽检测效能较国外试剂盒小口试剂盒，因为目前尚无彻底清除HBVDNA的药2个数量级，但基本能