毕业论文--实时荧光定量PCR检测乙型肝炎病毒DNA的研究

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1、论文评阅结果：论文评阅人：广州医学院成人高等教育专升本毕业论文实时荧光定量PCR检测乙型肝炎病毒DNA的研究-9-论文提交时间：2013年8月目录摘要……………………………………………………………………………….......3关键词…………………………………………………………………………………...3第一章HBVDNA含量与血清标记物(HBVM)的关系…………………………...….31.1HBVDNA含量与HBeAg抗HBe …………………………………………….…31.2HBVDNA含量与HBsAg／抗HBs………………………………………………41.3HBVDNA含量与HBV前S1蛋白、前

2、S2蛋白、大蛋白的关系………..….…41.4HBVDNA含量和HBV的基因型…………………………………………….….41.5HBVDNA含量与肝功能……………………………………….…..…………….4第二章HBVDNA定量的临床意义…..………………………………………………5第三章HBVDNA定量的方法……………………………………………………..…53.1PCRELISA……………………………………………………………………..…..53.2竞争定量PCR(cPCR)…………………………………………………………...…53.3实时荧光定量PCR……………………………………………………………

3、…...5第四章实时荧光定量PCR检测HBV-DNA和Elisa法检测HBV的结果对比…..6第五章讨论……………………………………...………………………………....…7第六章结论………………………………………………………………...…………8参考文献…………………………………………………………………………….....8-9-实时荧光定量PCR检测乙型肝炎病毒DNA的研究【摘要】 探讨乙型肝炎血清标志物和乙型肝炎病毒DNA量之间的关系，分析荧光定量PCR在乙型肝炎检测中的作用。HBVDNA定量是目前诊断乙型肝炎、判断病毒复制和评价患者肝脏病变、预后及药物疗效的重要指标之一，但在指导诊疗

4、时仍需结合血清标记物、肝损害指标乃至HBV基因分型。HBVDNA定量的方法有PCR核酸探针杂交法、RELISA、竞争定量PCR、实时荧光定量PCR，本文综述定量检测HBVDNA意义及PCR检测方法。结论:实时荧光定量PCR检测乙型肝炎病毒DNA是反映HBV复制水平的可靠指标，有助于疾病的诊断及预后判断。【关键词】 乙型肝炎病毒核糖核酸实时荧光定量PCR全世界超过20亿人感染过乙肝病毒，大约3.5亿人为乙型肝炎患者，每年约有100万人死于乙型肝炎病毒相关的肝硬化和肝癌。而我国更是全球乙型肝炎的高发国家之一，人群乙型肝炎病毒HbsAg的携带率高达10%。多年以来临床诊断HBV感染情况通常采用酶

5、联免疫吸附试验(ELISA)检测乙肝病毒血清标志物模型(HBV-M，俗称两对半)，以了解和判断乙型肝炎病毒在体内的复制水平、传染性强弱等，对乙型肝炎的诊断、抗病毒疗效观察及预后判断均具有重要意义。实时荧光定量PCR是近几年发展起来的，可以定量检测HBV-DNA，由于其灵敏、快速、假阴、假阳性率极低，该技术已被广泛应用于临床检测，结合ELISA检测能够更为精确地了解HBV的感染情况。以下就对HBVDNA定量在诊断治疗上的定量原理和意义、定量方法作综述，探讨乙型肝炎血清标志物和乙型肝炎病毒DNA数量之间的关系，分析荧光定量PCR在乙型肝炎检测中的作用。第一章HBVDNA含量与血清标记物(HBV

6、M)的关系　　1．1 HBVDNA含量与HBeAg抗HBe HBeAg阳性是病毒复制活跃的标志，HBeAg阳性与检出HBVDNA的符合率接近100%，两者存在极强的相关性。一般认为若HBeAg阴性或抗HBe阳性，则提示HBV复制减弱，病情得到控制。但大量文献指出，HBeAg转阴或抗HBe的出现并不说明病毒复制被控制，约50%抗HBe阳性的患者血清检出HBVDNA。单春梅等［3］指出这可能是因为HBVDNA前C／C区基因变异，1896位G→A突变，原来TGG变成终止子(TAG)，丧失HBeAg合成分泌功能，逃脱细胞毒T淋巴细胞(CTL)的免疫攻击。这种变异在我国乙肝患者中普遍存在，是导致病情

7、迁延、发生慢性肝炎、甚至肝硬化重要原因之一。姜燕等［4］指出当乙肝病毒携带者(ASC)血清HBVDNA含量为103～107copies／mL时，HBeAg阳性模式HBVDNA含量-9-显著高于HBeAg阴性者，血清HBeAg模式与HBVDNA定量之间有显著相关性(r=028，t＝119，P＜005)，HBVDNA含量大于小于这个范围则不存在相关性。由此推测，只有当体内HBVDNA含量在一定的范围内，机体的免疫应答才与HB