非发酵菌的鉴定.doc

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1、非发酵菌的鉴定定义：非发酵菌（nonfermenters）指一群需氧或兼性厌氧、不发酵糖类，能在普通培养基上生长的革兰阴性杆菌。主要存在外界环境中，种类繁多，多为条件致病菌或医院内感染菌。关于临床标本中NFB的意义，在混合培养物中见到时，必须考虑到患者的情况和标本来源。一般来说，以纯培养方式分离自正常无菌部位的NFB，一定要鉴定到种并进行抗生素敏感性试验。目前CLSI中，K-B法除了假单胞菌属、不动杆菌属、嗜麦芽窄食单胞菌和洋葱伯克霍尔德菌有抗生素敏感性实验的判断标准外，其他非发酵菌没有K-B法的标准。一、鉴定原则：1．血、无菌部

2、位（脑脊液、胸水等），特殊病人，少见菌可用API-20NE或VIKETTWO-GN卡鉴定。2．其它部位如呼吸道标本、临床常见的非发酵，根据菌落形态、生化反应、抗生素耐药谱等综合分析手工法鉴定即可。二、非发酵性菌基本分类：假单胞菌属Pseudomonasspp.（20多个临床上重要菌种中，铜绿假单胞菌、荧光假单胞菌和恶臭假单胞菌等最常见。）不动杆菌属Acinetoacterspp.（最常分离的种鲍曼不动杆菌、鲁氏不动杆菌、溶血不动杆菌等）窄食单胞菌Stenotrophomonasspp.（嗜麦芽窄食单胞菌、非洲嗜麦芽窄食单胞菌）伯克

3、霍尔德菌Burkholderiaspp.（洋葱伯克霍尔德菌、唐菖蒲伯克霍尔德菌、类鼻疽伯克霍尔德菌等）鞘氨醇单胞菌属Sphingomonasspp.（少动鞘氨醇杆菌）无色杆菌属Achromobacterspp.（木糖氧化无色杆菌）希瓦氏菌属Shewanellaspp.（腐败希瓦氏菌海藻希瓦氏菌）产硷菌属Alcaligenesspp.黄杆菌属Flavoacteriumspp.莫拉菌属Moraxellaspp.罗尔斯通菌属Ralstoniaspp.食酸菌属Acidovoraxspp.丛毛单胞菌属Comamonasspp.甲基杆菌属Me

4、thylobacteriumspp.等还有一些未定名的菌群三、辨认非发酵菌的基本要点1.分离培养基上的菌落有以下情况初步考虑非发酵菌的存在a.培养基上生长较差或中国蓝上不生长的阴性菌。（如艾肯菌属、心杆菌属、金氏杆菌属）b.中国蓝平板上为不发酵乳糖的菌落，氧化酶阳性的高度怀疑非发酵菌。但并非所有的氧化酶阳性的均为非发酵菌。如弧菌属、气单胞菌属、邻单胞菌属、巴斯德菌属等。c.革兰阴性菌在三糖管上培养，底层和斜面均不变色，疑为非发酵菌。但容易受影响。2.葡萄糖的利用大部分非发酵菌生长缓慢产生弱酸，而蛋白胨形成的产物即可升高培养基的PH

5、值，中和非发酵菌产生的弱酸性产物。根据他的代谢特点，用氧化-发酵培养基鉴别分类该类菌。附：氧化-发酵葡萄糖培养基（O-F培养基）配方成分:蛋白胨0.8g氯化钠2.0g三水磷酸氢二钾0.15g葡萄糖4.0g琼脂1.1g蒸馏水400.0ml方法:热溶,调PH7.1,加入1%溴麝香草酚兰酒精溶液1.2ml分装,8磅15分钟,备用.*（O-F培养基）蛋白胨与糖类比为0.2：1实验室中根据氧化发酵葡萄糖的情况发酵葡萄糖发酵菌肠杆菌科弧菌科非发酵菌氧化型非氧化型3．动力：鉴别分类的依据动力阳性的非发酵菌主要有：假单胞菌属、窄食单胞菌、伯克霍尔

6、德菌、无色杆菌属、希瓦氏菌属、产硷菌属、鞘氨醇单胞菌属（18-22℃）甲基杆菌属等动力阴性的非发酵菌主要有：不动杆菌属、黄杆菌属、莫拉菌属等4．氧化酶试验：细胞色素氧化酶的产生与否鉴别分类氧化酶试验阳性的非发酵菌主要有：假单胞菌属、伯克霍尔德菌、无色杆菌属、希瓦氏菌属、黄杆菌属、莫拉菌属等氧化酶试验阴性的非发酵菌主要有：不动杆菌属、窄食单胞菌等5．在中国兰上生长能力：一般在35℃24小时生长良好，但有些需要35℃24小时后在室温或30℃继续培养24小时。6.色素：（常见菌）产黄色素的有：洋葱伯克霍尔德菌、唐菖蒲伯克霍尔德菌、嗜麦芽

7、窄食单胞菌、金黄杆菌属、少动鞘氨醇单胞菌属等；产蓝绿色素的有：Pae产荧光色素的有：Pae、恶臭假单胞菌、荧光假单胞菌；产紫色色素的有：紫色色杆菌产红棕色或淡紫色的有：腐败希瓦氏菌四、实验室鉴定临床常见的非发酵菌根据菌落形态、生化反应和抗生素耐药谱鉴定临床常见非发酵菌。（一）铜绿假单胞菌目前临床分离率最高的非发酵菌.•天然耐多种抗生素.•易在呼吸道定植•菌落特征有三种典型菌落,黏液性菌落,粗造型菌落，侏儒型菌落鉴定要点：葡萄糖氧化型菌、氧化酶阳性、动力阳性，典型菌落为圆形、边缘呈伞状伸展、扁平湿润、有金属光泽、有特殊味道的棕色或绿

8、色的菌落。铜绿假单胞菌与产生荧光菌群的主要区别单鞭毛丛鞭毛水解明胶42℃生长铜绿假单胞菌+--/++荧光假单胞菌-++-恶臭假单胞菌-+--（二）不动杆菌不动杆菌属：（最常分离的种为鲍曼不动杆菌、鲁氏不动杆菌、溶血不动杆菌等）鉴定要点：葡萄糖氧化型