实验九：非发酵菌

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1、实验九：非发酵菌实验目的掌握非发酵菌的基本特征和鉴定程序掌握非发酵菌分类的鉴别试验不发酵革兰阴性杆菌假单胞菌属：铜绿假单胞菌(ATCC)不动杆菌属：硝酸盐不动杆菌产碱杆菌属：粪产碱杆菌不发酵革兰阴性杆菌鉴定程序见检验程序非发酵菌的鉴定要点，尤其是铜绿假单胞菌的鉴定。1、培养特点及菌落特征：在普通琼脂平板上产生特征性的蓝绿色水溶性绿脓素和黄绿色青脓素，血平板上形成大而扁平，湿润，边缘不齐，有金属光泽，有生姜气味的灰绿色菌落，并形成透明溶血环最适生长温度35℃，4℃不生长，42℃可生长2、95%以上的铜绿假单胞菌可通过观察以下几个特征而得到鉴定：氧化酶阳性（10秒内）

2、。菌落较大，生姜样气味。绿脓素产生。少数铜绿假单胞菌可产生其他颜色色素，如红脓素（红色），黑脓素（棕色到黑色），青脓素（黄色）。实验内容一、ＧＳ、氧化酶试验二、接种非发酵菌生化编码鉴定管三、鞭毛染色非发酵菌生化编码鉴定管原理：该系列鉴定共有9种生化培养基，共10项试验，参照下述方法，将试验结果换算成4位数字，加以数值化后查表。例：某一分离菌株，具有下列鉴定结果，数值化后为1734，查表得知：可能为施氏假单胞菌和洋葱单胞菌，再按表中要求做硝酸盐产气补充实验区分。1组2组3组4组O-F氧化酶4分精氨酸4分硝还4分厌氧2分枸橼酸2分甘露醇2分DNA酶2分需氧1分麦芽糖1

3、分木糖1分乙酰胺1分结果：需氧+++-+++--得分：1734非发酵菌生化编码鉴定管注意事项：O-F试验接种2支编码管，1支加无菌石蜡油，另1支不加。观察结果时按表中说明进行。硝酸盐还原试验结果解释：变红阳性沿试验管加ＡB液各少许不变加锌粉不变阳性，产气变红阴性思考题：硝酸盐还原试验原理？某些细菌能还原培养基中的硝酸盐,生成亚硝酸盐和氮气等.硝还试验是测定还原过程中生成的亚硝酸盐.如培养基中有亚硝酸盐存在,则亚硝酸盐与醋酸生成亚硝酸,亚硝酸与对氨基苯磺酸生成重氮苯磺酸,后者与a-萘胺结合成N-a-萘胺偶氮苯磺酸.假单胞菌等能使硝酸或亚硝酸盐还原为氮气,此为脱硝化或

4、脱氮化作用.注意事项若加入硝酸盐试剂不出现红色,需检查硝酸盐是否已被还原,可于原试管内再加入少许锌粉,如出现红色,表示硝酸盐仍然存在.若不出现红色,表示硝酸盐已衩还原为氨和氮.鞭毛染色普通染色法一般无法看到鞭毛，要用特殊染色的方法，常采用镀银染色法和鞭毛染色法等，本次实验采用镀银染色法。方法：在无菌平皿中加10ML左右蒸馏水，用接种环挑一环铜绿假单胞菌，在水面轻轻飘散，可适当研磨，静置10分钟，从表面取一环菌液加在洁净玻片上，室温或温箱内烘干，固定，加甲液染15分钟，流水下冲洗，加乙液染10分钟，洗去，吸干后油镜观察，可见铜绿假单胞菌为单鞭毛。另一组同学按上述方法

5、，做变形杆菌的鞭毛染色，观察周鞭毛。思考题：鞭毛染色法的原理？