非发酵菌的培养与鉴定ppt课件.ppt

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1、非发酵菌和嗜血杆菌的培养和鉴定苏州大学附属第二医院微生物室周惠琴非发酵菌和嗜血杆菌的培养和鉴定实验目的实验内容操作步骤结果观察1234一.实验目的掌握常见非发酵菌的菌落特点、染色形态及生化反应鉴定实验。掌握嗜血杆菌属的菌落特点及鉴定实验。二.实验内容1.铜绿假单胞菌、嗜麦芽窄食单胞菌、洋葱伯克霍尔德菌、鲍曼不动杆菌使用四区划线法接种于血琼脂、巧克力琼脂平板上，在浓度为5%的CO2，35°C孵育箱中培养18-24h后观察两种平板上各菌落形态特点，并进行生化反应鉴定和结果判读。2.流感嗜血杆菌和副流感嗜血杆

2、菌使用四区划线法接种于巧克力平板上，在浓度为5%的CO2，35°C孵育箱中培养18-24h后观察两细菌的菌落形态和特点。3.利用“卫星现象”对嗜血杆菌属进行鉴定。克氏双糖铁（KIA）半固体（动力）枸橼酸盐（CIT）穿刺后斜面划线垂直穿刺斜面划线硝酸盐（NIT）液体接种(非）赖氨酸脱羧酶、鸟氨酸脱羧酶、精氨酸脱羧酶、氨基酸脱羧酶对照非发酵菌生化反应的选择氧化酶试剂待测菌落氧化酶阳性氧化酶实验操作步骤：使用无菌滤纸，蘸取待测细菌单个菌落→滴加配制好的氧化酶试剂→3-5秒钟后观察结果。结果判读：出现红色为阳性

3、，不变色为阴性。非发酵菌生化鉴定反应共选“套餐”斜面产碱，底层不变H2S阴性K/K，H2S-斜面产酸，底层产酸产气，H2S阴性（A/A,气体+，H2S-）斜面产碱，气体阴性，H2S阳性（K/A,气体+，H2S+）动力实验左管阳性，右管阴性枸橼酸盐利用实验上管阳性，下管阴性氨基酸脱羧酶实验赖氨酸、鸟氨酸脱羧酶阴性，精氨酸脱羧酶阳性各生化管阴阳性结果的判读革兰阴性杆菌菌体细长，长短不一，大小为(1.5-5)μm×(0.5-1)μm，有时呈球杆状或纹状，成对或短链状排列，有单鞭毛。铜绿假单胞菌(P.aerug

4、inosa)在血平板上形成大而扁平，湿润的灰绿色或蓝绿色菌落，边缘不齐，似毛玻璃样，菌落呈现金属光泽，有生姜味，常有透明溶血环。铜绿假单胞菌在血平板上的菌落形态铜绿假单胞菌(P.aeruginosa)1.典型型：菌落形态不规则，边缘呈伞状延伸。铜绿假单胞菌(P.aeruginosa)铜绿假单胞菌在血平板上的菌落形态2.大肠型菌样型：菌落圆形凸起，灰白透明，似大肠埃希菌菌落。铜绿假单胞菌(P.aeruginosa)铜绿假单胞菌在血平板上的菌落形态3.粗糙型：菌落呈纽扣状，表面粗糙或菌落中央隆起边缘扁平。铜

5、绿假单胞菌(P.aeruginosa)铜绿假单胞菌在血平板和巧克力平板上的菌落形态4.粘液型：菌落光滑，隆起，呈黏液状，嵌入培养基中，不易挑起，似肺炎克雷伯菌菌落，但菌落呈无色半透明。铜绿假单胞菌(P.aeruginosa)铜绿假单胞菌在血平板上的菌落形态氧化酶KIA动力葡萄糖O/F枸橼酸盐硝酸盐还原赖氨酸脱羧酶鸟氨酸脱羧酶精氨酸脱羧酶乙酰胺底层斜面产气H2S铜绿假单胞菌+KK--+O++--++铜绿假单胞菌氧化酶阳性，触酶阳性。铜绿假单胞菌的生化鉴定反应铜绿假单胞菌主要生化反应结果铜绿假单胞菌的生化鉴

6、定结果革兰阴性杆菌，有端鞭毛，无芽孢、荚膜。嗜麦芽窄食单胞菌(S.maltophilia)在血琼脂平板上35°C培养18-24h，形成圆形，光滑，湿润，浅黄色小菌落，并产生刺激的氨味。嗜麦芽窄食单胞菌(S.maltophilia)嗜麦芽窄食单胞菌在血平板上的菌落形态嗜麦芽窄食单胞菌氧化酶阴性，触酶阳性。氧化酶KIA动力葡萄糖O/F枸橼酸盐硝酸盐还原赖氨酸脱羧酶鸟氨酸脱羧酶精氨酸脱羧酶甘露醇麦芽糖底层斜面产气H2S嗜麦芽窄食单胞菌-KK--+O-++---+嗜麦芽窄食单胞菌生化鉴定反应嗜麦芽窄食单胞菌主要

7、生化反应结果革兰阴性杆菌，直或微弯屈，单个或成对排列，有3-8根从鞭毛。洋葱伯克霍尔德菌（B.cepacia）洋葱伯克霍尔德菌在显微镜下形态（革兰染色）在血平板上形成中等大小、不透明、湿润凸起的黄色菌落。某些菌落有特殊菌落形态（皱落状、粘液样）、特殊色素、特殊气味。洋葱伯克霍尔德菌（B.cepacia）洋葱伯克霍尔德菌在血平板上菌落形态在麦康凯平板上形成较小、湿润的半透明菌落。洋葱伯克霍尔德菌（B.cepacia）洋葱伯克霍尔德菌在麦康凯平板上的菌落形态洋葱伯克霍尔德菌氧化酶迟缓弱阳性，触酶阳性。氧化酶

8、KIA动力葡萄糖O/F枸橼酸盐硝酸盐还原赖氨酸脱羧酶鸟氨酸脱羧酶精氨酸脱羧酶麦芽糖甘露醇底层斜面产气H2S洋葱伯克霍尔德菌VKK--+O+++V-++洋葱伯克霍尔德菌生化鉴定反应洋葱伯克霍尔德菌主要生化反应结果革兰阴性球杆菌，大小为(1-1.5)μm×(1.5-2.5)μm，常成双排列，似奈瑟菌，可单独排列成丝状或链状。鲍曼不动杆菌（A.baumannii）鲍曼不动杆菌纯培养革兰染色形态在血平板上形成较大灰白色、圆形、凸起、光滑、不透明、直