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《免疫调节因子TIPE2慢病毒载体的构建及病毒包装-论文.pdf》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、壬耀辉等免疫调节冈子TIPE2慢病毒载体的构建及病毒包装第10期077doi:10.3969/j.issn.1000-484X.2013.10.017·免疫学技术与方法·免疫调节因子TIPE2慢病毒载体的构建及病毒包装王耀辉娄强陈九格张军马远方(河南大学医学院抗体药物河南省工程实验室,开封475004)中国图书分类号R392-3文献标识码A文章编号1000484X(2013)10.1077-03[摘要]目的:TIPE2[Tumornecrosisfactor(TNF)一inducedprotein8-like2(TNF
2、AIP8L2),TIPE2]慢病毒载体的构建及病毒包装。方法:首先构建带有3×FLAG标签的pCDNA3.1—3×FLAG—TIPE2质粒.确认表达后再将标签连同TIPE2序列一起克隆入pCDH。CMV.MCS—EF1一Puro慢病毒表达载体,然后与pMD2.G、psPAX2共转染293T细胞并收获上清,进一步刖含病毒颗粒的上清感染PLC/PRF/5及HEK293T细胞,Westernblot检测感染后TIPE2蛋白表达情况。结果:pCDNA3.1—3XFLAG—TIPE2及pCDH.CMV—MCS—EF1一Puro—
3、TIPE2质粒构建成功,并能最终产出具有感染性的病毒颗粒。结论:成功构建了TIPE2慢病毒载体并获得具有感染性的病毒颗粒,为进一步研究TIPE2功能提供了有力的支持。[关键词]免疫调节因子;TIPE2;慢病毒;病毒包装ConstructionofhumanimmuneregulatorTIPE2lentiviralvectorandlentiviruspackagingWANGYao—Hui,LOUQiang,CHENJiu—Ge,ZHANGJun,MAYuan—Fang.HenanEngineeringLaborat
4、oryMedi—cine,theMedicalCollegeofHenanUniversity,Kaifeng475004,China[Abstract]Objective:TopackagelentiviruscarryinghumanTIPE2(Tumornecrosisfactor(TNF)一inducedprotein8-like2(TNFAIP8L2),TIPE2)gene.Methods:ThehumanTIPE2genewasclonedintopDNA3.1—3XFLAGvectortogenerate
5、pCDNA3.1—3XFLAG—TIPE2plasmid.aftersequencing.3×FLAG—TIPE2fragmentwasinsertedintopCDH—CMV—MCS—EF1一Purolentiviralvector.ThepCDH—CMV—MCS—EFI—Puro/3×FLAG—TIPE2plasmidswereCO—transfectedwithpMD2.G.psPAX2plasmidsintoHEK293Tcellstoharvestinfectiousvirusparticles,follow
6、edbyinfectingPLC/PRF/5andHEK293Tcells.Results:TheTIPE2expressinglentiviralvectorwasconstructedsuccessfully,andfinallygotinfectiousvirusparticles.Conclusion:ThehumanTIPE2recombinantlentiviralvectorwassuccessfullyconstructedandpackaged.[Keywords]Immuneregulator;TI
7、PE2;Lentivirus;ViruspackageTIPE2lTumornecrosisfactor(TNF)一induced抗肿瘤的目的Jprotein8-like2(TNFAIP8L2)]是近年被鉴定出来的在人体内,TIPE2除了在造血细胞内表达外,还新型免疫调节因子,隶属于TNFAIP8家族.具有维广泛存在于肝、脑、食管及子宫等组织中,提示其具持机体免疫自稳的功能⋯。在老鼠体内,TIPE2主有调节机体多种生命活动的功能_4]。对TIPE2进要表达于淋巴系统或炎症组织,可通过抑制TCR(T行深入了解以揭示其在体
8、内特别是疾病发生发展过细胞受体)及TLR(Toll—likereceptor)通路来发挥抗程中扮演的角色,现已逐渐成为研究热点。本研究炎作用l2J。除此之外.TIPE2还可通过抑制Ras下旨在设计并构建出携带人TIPE2基因的慢病毒表达游效应分子特别是Ral及AKT的活化来达到抗炎、载体,并对其进行包装,以提高其在多种细胞中的感染
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