免疫调节因子TIPE2慢病毒载体的构建及病毒包装-论文.pdf

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1、壬耀辉等免疫调节冈子TIPE2慢病毒载体的构建及病毒包装第10期077doi：10．3969／j．issn．1000-484X．2013．10．017·免疫学技术与方法·免疫调节因子TIPE2慢病毒载体的构建及病毒包装王耀辉娄强陈九格张军马远方(河南大学医学院抗体药物河南省工程实验室，开封475004)中国图书分类号R392-3文献标识码A文章编号1000484X(2013)10．1077-03[摘要]目的：TIPE2[Tumornecrosisfactor(TNF)一inducedprotein8-like2(TNF

2、AIP8L2)，TIPE2]慢病毒载体的构建及病毒包装。方法：首先构建带有3×FLAG标签的pCDNA3．1—3×FLAG—TIPE2质粒．确认表达后再将标签连同TIPE2序列一起克隆入pCDH。CMV．MCS—EF1一Puro慢病毒表达载体，然后与pMD2．G、psPAX2共转染293T细胞并收获上清，进一步刖含病毒颗粒的上清感染PLC／PRF／5及HEK293T细胞，Westernblot检测感染后TIPE2蛋白表达情况。结果：pCDNA3．1—3XFLAG—TIPE2及pCDH．CMV—MCS—EF1一Puro—

3、TIPE2质粒构建成功，并能最终产出具有感染性的病毒颗粒。结论：成功构建了TIPE2慢病毒载体并获得具有感染性的病毒颗粒，为进一步研究TIPE2功能提供了有力的支持。[关键词]免疫调节因子；TIPE2；慢病毒；病毒包装ConstructionofhumanimmuneregulatorTIPE2lentiviralvectorandlentiviruspackagingWANGYao—Hui，LOUQiang，CHENJiu—Ge，ZHANGJun，MAYuan—Fang．HenanEngineeringLaborat

4、oryMedi—cine，theMedicalCollegeofHenanUniversity，Kaifeng475004，China[Abstract]Objective：TopackagelentiviruscarryinghumanTIPE2(Tumornecrosisfactor(TNF)一inducedprotein8-like2(TNFAIP8L2)，TIPE2)gene．Methods：ThehumanTIPE2genewasclonedintopDNA3．1—3XFLAGvectortogenerate

5、pCDNA3．1—3XFLAG—TIPE2plasmid．aftersequencing．3×FLAG—TIPE2fragmentwasinsertedintopCDH—CMV—MCS—EF1一Purolentiviralvector．ThepCDH—CMV—MCS—EFI—Puro／3×FLAG—TIPE2plasmidswereCO—transfectedwithpMD2．G．psPAX2plasmidsintoHEK293Tcellstoharvestinfectiousvirusparticles，follow

6、edbyinfectingPLC／PRF／5andHEK293Tcells．Results：TheTIPE2expressinglentiviralvectorwasconstructedsuccessfully，andfinallygotinfectiousvirusparticles．Conclusion：ThehumanTIPE2recombinantlentiviralvectorwassuccessfullyconstructedandpackaged．[Keywords]Immuneregulator；TI

7、PE2；Lentivirus；ViruspackageTIPE2lTumornecrosisfactor(TNF)一induced抗肿瘤的目的Jprotein8-like2(TNFAIP8L2)]是近年被鉴定出来的在人体内，TIPE2除了在造血细胞内表达外，还新型免疫调节因子，隶属于TNFAIP8家族．具有维广泛存在于肝、脑、食管及子宫等组织中，提示其具持机体免疫自稳的功能⋯。在老鼠体内，TIPE2主有调节机体多种生命活动的功能_4]。对TIPE2进要表达于淋巴系统或炎症组织，可通过抑制TCR(T行深入了解以揭示其在体

8、内特别是疾病发生发展过细胞受体)及TLR(Toll—likereceptor)通路来发挥抗程中扮演的角色，现已逐渐成为研究热点。本研究炎作用l2J。除此之外．TIPE2还可通过抑制Ras下旨在设计并构建出携带人TIPE2基因的慢病毒表达游效应分子特别是Ral及AKT的活化来达到抗炎、载体，并对其进行包装，以提高其在多种细胞中的感染