慢病毒载体构建及结构优化

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1、·310·国外医学分子生物学分册2002年第24卷第5期其次,采用一种含有拯救rAAV基因组的细胞株,能感染分裂细胞又能感染非分裂细胞;③它的内源[9]又提高了包装效率5倍。Mamounas等报道运用性弱启动子对外源基因的调控无明显的干扰作用;Ad52多聚赖氨酸2转铁蛋白2DNA2Ad8复合物感染且启动的方向不指向宿主细胞DNA,因此通过插入[10]HeLa细胞,可使转导效率提高近245倍。病毒启动子而激活细胞原癌基因的可能性极小;④Lebkowski等将AAV的rep和cap基因转染入其基因组结构极为稳定,有利商业开发;⑤可以口服[18]293细胞,建立了rAAV包装

2、细胞系,也增加了病毒给药,使给药方式更加方便。尽管AAV的一些生的滴度。物学特性尚待阐明,AAV载体在体内能否定向整纯化AAV病毒的传统方法是加热失活法和平合尚待明确,但现有资料使人们有理由相信AAV衡密度梯度离心法。为了获得高滴度的rAAV载体载体将是未来基因转移中最有希望的新一代病毒载用于临床实验,Fan等用增加rep2cap质粒拷贝数来体之一。[11]增加产量,但需要仔细调节Rep78ö68的水平。参考文献Hermens用iodixanol密度梯度离心法取代Cscl法,缩短了离心时间,获得了高浓度的rAAV,减少1BernsKI,LindenRM.Bioessay

3、s,1995;17:237了Cscl对病毒的毒性作用[12]。对于AAV22而言,2SanliogluSetal.HumanGeneTher,1999;10:591由于存在细胞表面受体3SamulskiRJetal.EMBOJ,1991;10:3941,所以能用亲和层析法纯化,4BalagueCetal.JVirol,1997;71:3299避免了Cscl和帮助者病毒的污染。这些细胞表面受5TangRS.Bioessays,1994;16:785体包括硫酸乙酰酣素糖蛋白受体、联合辅助受体、6KotinRM.HumanGeneTher,1994;5:793[13]AVB5

4、整合素受体和人FGF受体。7KearnsWGetal.GeneTher,1996;3:7485rAAV载体目的基因的表达8AlexanderIEetal.JVirol,1994;68:82829FlotteTRetal.GeneTherapy,1995;2:29基因治疗能否成功的关键是靶基因能在靶细胞10MammounasMetal.GeneTherapy,1995;2:429内高效、稳定、足量、长期的表达。已有研究表明11FanPD,DongJY.HumGeneTher,1997;8:87rAAV能够在动物体内超过18个月的表达。除了采12HermensWTetal.

5、HumGeneTher,1999;10:1885用更强的启动子和增强子来取代常用的CMV、13ZolotukhinS.GeneTher,1999;6:973[14]14RuanHetal.Neoplasia,2001;3(3):255SV40启动子之外,缺氧(<0.01%O2)、紫外[15][16]15KanazawaTetal.CancerGeneTher,2001;8(2):99线、羟基脲、perfluorochemical(PFC)liquids、16WeissDJetal.MolTher,2000;2(6):624[17]细胞因子、肿瘤坏死因子A等也可提高目的基

6、因17NathwaniACetal.GeneTher,2000;7(3):183的表达。18MatthewJDetal.NatureMedicine,1998;4(10):综上所述,AAV作为载体有许多优点:①它是1131一种非病原微生物,与已知的人类疾病无关;②它既(2002201216　收稿)慢病毒载体构建及结构优化李振宇综述　徐开林　潘秀英审阅徐州医学院附属医院血液科(徐州,221002)　　摘要　慢病毒载体目前是基因治疗中研究较多的载体,与通常使用的逆转录病毒载体和腺病毒载体比较,它有感染非分裂期细胞及容纳外源性目的基因片段大等优点。对其结构的优化主要集中在提高

7、生物安全性、提高转基因表达、转基因表达的调控及载体靶向性等方面。本文介绍了慢病毒载体构建及结构优化方面的研究进展作一综述。关键词　慢病毒载体;载体构建;结构优化　　目前基因治疗中目的基因的转移工具多采用病常用。由于逆转录病毒载体只能感染分裂期细胞,容毒载体,其中以逆转录病毒载体和腺病毒载体最为纳外源基因的DNA片段长度不超过8kb;腺病毒国外医学分子生物学分册2002年第24卷第5期·311·载体感染细胞时,病毒DNA游离在细胞核内,并不高速离心对载体进行浓缩,提高了滴度;转移质粒中整合到染色体上,在体内不能实现稳定的长期表达,除含有包装