可诱导慢病毒载体的优化策略及应用

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1、维普资讯http://www.cqvip.com细胞生物学杂志ChineseJournalofCellBiology2007，29：809—815http：／／www．cjcb．org可诱导慢病毒载体的优化策略及应用黄芳王毅刚蔡荣杨光华钱程(浙江理工大学生命科学学院，新元医学与生物技术研究所，杭州310018)摘要以1型人免疫缺陷病毒(HIV—1)为基础构建的慢病毒载体具有可感染非分裂细胞、免疫反应小、携带的基因片段容量大和可整合进宿主基因组而长期表达等优点，因而成为最理想的基因转移载体之一。可诱导慢病毒载体介导的可诱导基因表达系统能够有效控制目的基因表达，扩大了慢病毒载体的

2、临床应用潜能，成为很有前景的基因治疗载体。主要介绍带有四环素和其他几种诱导系统的可调控性慢病毒载体及其改进，以及可诱导慢病毒载体在RNA干扰中的应用。关键词慢病毒载体；可诱导；基因治疗随着对人类疾病发生的基因水平认识的逐步加产物参与形成整合前复合物。深，基因治疗已经成为治疗肿瘤和遗传病等难治性疾近年来，以慢病毒为载体的基因治疗研究发展非病的有效方法。目前用于基因治疗的载体大多数为常迅速。从第一代慢病毒载体的应用至第三代慢病病毒载体。以1型人免疫缺陷病毒(HIV—1)为代表的毒载体系统的改进以及自我灭活型慢病毒载体系统慢病毒载体具有可感染非分裂细胞、免疫反应小和(self-in

3、activationvectors，SIN)的产生，通过逐步去除可整合进宿主基因组长期表达等优点。适于体内基因野生型病毒基因组中的致病基因而大大提高了其生治疗，因而成为新一代的高效基因转移载体研究热点。物安全性。第一代慢病毒载体系统的构建以Naldini然而，发展应用于临床基因治疗的慢病毒载体，等⋯应用的三质粒系统为代表，由包装，包膜及载体要求能够严格控制目的基因的表达，并确保治疗有效质粒组成，生产慢病毒的同时降低了野生型病毒产生性和减少毒副作用。利用可诱导基因表达系统构建的可能。在此基础上，应用水泡性口炎病毒G蛋白的可调控型慢病毒载体，依赖无毒性小分子药物或激(VSV—G)

4、包膜构建的假构型慢病毒载体，其病毒滴度素在转录水平上能有效控制目的基因定时定量地表和病毒感染能力都得到了提高，使之能够感染原代肝达，扩大了慢病毒载体用于基因治疗的潜能。因此，细胞、外周血淋巴细胞和成纤维细胞等。为进一步可诱导慢病毒成为极有前景的基因治疗载体，也是当降低野生型病毒产生的可能性，第二代慢病毒载体系前慢病毒载体研究的新焦点。统又去除包装质粒中的4个辅助基因。结果表明不但没有降低病毒滴度，而且增加了生物安全性【2]。第1慢病毒的结构特征及载体应用三代慢病毒载体系统的构建是在三质粒系统基础上增慢病毒属于逆转录病毒科，与一般逆转录病毒相加一个含rev基因的质粒而形成四质粒

5、载体系统【3]。比，其基因组结构更为复杂。以HIV一1为典型代表改进后的系统进一步减少了HIV一1包装所需的序列的慢病毒，其基因组包含3个结构基因gag、pol、同源性结构，且对病毒滴度和转导效率都没有影响。env，4个辅助基因vif、vpr、nef、vpu和2个调节基SIN慢病毒系统将病毒基因组3’端LTR中U3区的增因tat、rev，并且在病毒基因组的5’端和3’端各有一强子和启动子序列去除。使LTR区的转录激活能力下段相同的核苷酸序列，称为长末端重复序列(1ongter-降，并使得所形成的载体缺少HIV增强子和启动子而minalrepeat，LTR)。结构基因gag编码

6、病毒核心蛋产生失活的前病毒，因此消除了对外源启动子的干扰白，pol基因编码病毒复制所需要的酶，env基因则编作用和对下游基因组中原癌基因的激活【4]。目前，人码病毒的包膜糖蛋白；调节基因tat和rev编码的蛋白收稿日期：2007—05—28接受日期：2oo7一O7—2l质分别在转录及转录后水平调控病毒基因表达；辅助国家高技术研究发展计划(863计划)(No．2006AA02Z126)，国家重点基因vpu参与病毒颗粒的组装，vif基因编码的蛋白质基础研究发展规划(973计划)(No．2004CB518804)和浙江省自然科学基金(No．Y205282)资助与病毒的感染性有关，n

7、ef基因编码负调节蛋白，对通讯作者。Tel：057l一86843186，Fax：0571-86843185，E—mail：结构和调节基因的表达有下调作用。vpr基因编码的cqian3184@yahoo，tom，cn适用于生命科学各研究领域的宝尔超纯水系统，使实验数据更逼真Tel：021．31263268WWW．baolor．com维普资讯http://www.cqvip.com810综述们已成功应用慢病毒载体有效感染造血干细胞、神Kafri等叫1勾建了一个包含完整四环素调控系统经细胞、肝细胞、视网膜色素