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1、连Hereditas(Beijing)2014年6,EJ,36(6):574—583WWW.chinagene.cn研究报告利用SSH方法筛选与鉴定AC3基因缺失小鼠主要嗅觉表皮内的差异表达基因曹振龙,郝江叶,周艳芬,一,张3,倪志华,胡远想3,刘伟丽,李永超4,DanielR.Storm,马润林49王振山1,21.河北大学生命科学学院,保定071002;2.河北省生物工程技术研究中心,保定071002;3.河北大学基础医学院,保定071002;4.中国科学院遗传与发育生物学研究所,北京100101;5.DepartmentofPharmacology,Un
2、iversityofWashington,Seattle,WA98195摘要:腺苷酸环化酶3(Adenylatecyclase3,AC3)基因在小鼠主要嗅觉表皮(Mainolfactoryepithelium,MOE)内的嗅觉信号传导中起着重要作用,AC3缺失是否会导致MOE内与之相关的基因发生差异表达,尚待确定。文章利用抑制性消减杂交(Suppressionsubtractivehybridization,SSH)方法,以AC3敲除(Ac3)及其同窝出生的野生型c3~/+Vj,鼠MOE为材料,构建了正向和反向两个消减文库,采用斑点杂交对消减文库进行初步筛选
3、,对筛选出的差异表达基因进行序列测定及生物信息学分析,并利用荧光定量PCR(qRT-PCR)方法对其进行验证。斑点杂交筛选获得了386个差异表达克隆,随机选取其中的80个进行DNA序列测定,经序列比对后发现有62个在GenBank上获得了与之相匹配的基因信息,其中24个上调差异表达克隆对应于kcnk3.mapk7、megfll等基因,38个下调差异表达克隆对应于tmem88b、c—mip、skpla、mlycd等基因。利用GeneOntology(GO)方法对这些差异表达基因进行蛋白功能注释,发现它们主要集中在分子结合、细胞周期、生物和细胞过程等功能方面选取
4、其中上调基因kcnk3和下调基因c.mip、mlycd、tmem88b及trappc5进行qRT-PCR验证。结果表明,在AC3小鼠MOE内kcnk3的表达量显著上调,是对照组小鼠的1.27倍,而c.mipmlycd、tmem88b和trappc5的表达量显著下调,为对照组小鼠的20%、7%、32%和29%。这些基因的功能与K通道、细胞发育与分化、脂肪代谢和膜蛋白转运等密切相关。推测它们可能与AC3基因共同作用,调节小鼠MOE内的嗅觉信号传导信息。关键词:腺苷酸环化酶3;主要嗅觉表皮;差异表达基因;抑制性消减杂交收稿日期:2013—11-24;修回日期:20
5、14—01一l6基金项目:国家自然科学基金项目(编号:31171191),河北省自然科学基金项目(编号:C2012201106),教育部留学人员回国启动基金项目(教外司留<2013>693号)和河北省生物工程重点学科经费资助作者简介:曹振龙,硕士研究生,专业方向:细胞分子生物学。E—mail:dafeizizhu@163.GOm通讯作者:王振山,教授,博士生导师,研究方向:动物行为遗传分子机制。E.mail:zswang@hbu.edu.cnDOI:l0.3724/SPJ.1005.2014.0574网络出版时间:2014.4一I11:35:35URL:ht
6、tp://www.cnki.net/kcms/detail/11.1913.R.20140401.1135.001.html第6期曹振龙等:利用SSH方法筛选与鉴定AC3基因缺失小鼠主要嗅觉表皮内的差异表达基因575Differentiallyexpressedgenesidentifiedinthemainolfactoryepi—theliumofmicewithdeficiencyofadenylatecyclase3byusingsup-pressionsubtractivehybridizationapproachZhenlongCao,Jiang
7、yeHao,YanfenZhou,ZheZhang,ZhihuaNi,YuanxiangHu,W_eiliLiu,YongchaoLi4,DanielR.Storm,RunlinZ.Ma4,ZhenshanWang,1.CollegeOfLireScience,HebeiUniversity,Baoding071002,China;2.ResearchCenterofBioengineeringofHebeiProvince,Baoding071002,China;3.CollegeofBasicMedicine,HebeiUniversity,Baodin
8、g071002,China;4.Instituteo
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