粉尘螨重组过敏原Derf11（副肌球蛋白）克隆表达、纯化及免疫学鉴定-论文.pdf

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1、中国免疫学杂志2014年第3O卷doi：10．3969／j．issn．1000-484X．2014．06．004粉尘螨重组过敏原Derf11(副肌球蛋白)克隆表达、纯化及免疫学鉴定①蒋聪利邬玉兰幸鹏杨平常刘志刚(深圳大学医学院过敏反应与免疫学研究所，深圳518060)中图分类号11392．11文献标志码A文章编号1000-484X(2014)06-0736-05[摘要]目的：克隆粉尘螨过敏原Derf11基因，表达、纯化该蛋白，并鉴定其免疫活性。方法：人工合成粉尘螨第11组过敏原Derf11基因，将其连接至pET-32a表达载体，用异丙基一B—D一硫

2、代半乳糖苷(IPTG)诱导表达后，通过Ni+亲和层析纯化重组过敏原Derf11。以粉尘螨过敏患者血清作为一抗，经Westernblot方法分析Derf11的免疫学特性。结果：获得高纯度的重组Derf11蛋白，SDS—PAGE结果显示表达产物pET一32a(+)-Derf11分子质量约为118ku。重组过敏原Derf11检测15份尘螨过敏性患者血清中特异性IgE，阳性率为20％。结论：获得的Derf11重组蛋白具有与天然蛋白相似的免疫学活性，为标准化抗原的临床特异性诊断和治疗及进一步的实验研究奠定基础。[关键词]粉尘螨；重组Deft11；表达；Wes

3、ternblot；IgECloning，expression，purificationandimmunologicalidentificationofDerf11，paramyosin，arecombinantallergenofdustmiteJIANGCong—Li，WUYu—Lan，XINGPeng，YANGPg—Chang，LIUZ—Gnng．InstituteofAllergicReactionandImmunology，SchoolofMedicine，ShenzhenUniversity，Shenzhen518060，China[Ab

4、stract]objective：Toclone，expressandpurifyofDermatophagoidesfarinae(Derf11)，andthentestitsimmunogenicity．Methods：ThegenecodingforDerf11wassynthesized，andwasthenlinkedwiththepET一32avector．TheexpressionplasmidpET32a(+)一Derf11wasinducedbyIPTG．Afterpurificationofrecombinantallergen

5、sDer11proteinsthroughtheNi+affinitychromatography。immunologicalallergicpatientsserumasthePrimaryantibody．Results：WeobtainhighpurityrecombinantDerf11protein．TheresultsofSDS-PAGEshowthattheexpressionproductisabout118KD．RecombinantallergenDerf11test15dustmitesallergicpatientsseru

6、mspecificIgE，positiveratewas20％．Conclusion：RecombinantallergenDerfl1obtainedhasthesimilarimmunologicactivitytonaturalDerf11protein．Itcanlaythe~undationforthespecificdiagnosis．treatmentandfurtherexperimentalstudiesofthedustmiteallergydisease．[Keywords]Dermatophagoidesfarinae；Re

7、combinationDerf11；Expression；Westernblot；SpecificIgE尘螨(HDM)是人们居住环境中接触性和吸附气管哮喘有紧密关系¨J。第1、2组过敏原是众所周性过敏原的重要来源之一，其中户尘螨知的尘螨主要过敏原，但有20％的螨过敏性患者体(Dermatophagoidespteronyssinus)和粉尘螨(Derma·内无抗一组和二组过敏原的特异性IgE，而在尘螨tophagoidesfarinae)是主要螨种。通过皮肤反应性体内含量较低的其他部分过敏原有较高的IgE结合测试、支气管激发钡0试、血清检测等方法鉴

8、定螨特异性，故需研究多种尘螨重组过敏原以制备出代表性性IgE和嗜碱性粒细胞组胺释放，已证明尘螨与支的混合重组过敏原疫苗J。