响应面法优化碱性蛋白酶提取野生山核桃籽粕蛋白-论文.pdf

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1、第39卷第3期粮食舯技锯；i}Vo1．39．No．32014年6月Grain5cienceandITechnolo~yand~EconomyJun．2O14响应面法优化碱性蛋白酶提取野生山核桃籽粕蛋白冯妙，王珏，揭雅娇，董曙，黄群(吉首大学食品科学研究所，湖南吉首416000)[摘要]为研究响应面法优化碱性蛋白酶提取野生山核桃籽粕蛋白质的工艺，在单因素试验的基础上考察了加酶量、pH值、提取温度和提取时间等条件对蛋白质提取率的影响。采用Box～BehnkenDesign试验设计，进行四因素三水平的中心

2、组合试验，建立了蛋白质提取率与各主效因子的二次回归模型方程。结果表明，最佳提取条件为加酶量4．O％、pill2．0、温度47℃、提取时间2．0h。在此条件下，蛋白质提取率可达81．90％。[关键词]野生山核桃；蛋白质；碱性蛋白酶；提取率；响应面法山核桃是一种寿命长、单株挂果率高的珍贵树2AB型鼓风恒温干燥箱、高速万能粉碎机：天津市泰种ⅢJ]，盛产于湖南、广西、四JIf的交界地——湘西怀斯特仪器有限公司；电子天平、722型分光光度计：化靖州。山核桃脂肪含量丰富，山核桃油呈金黄色，上海舜宇恒平科学仪器有

3、限公司；HH—s2型恒温水是防癌抗癌、抗衰老、提高记忆力的高级保健植物油。浴锅：金坛市成辉仪器厂；PH一2型酸度计：上海精科核桃油具有润肤、阴足肺气的功能，中医称山核桃为仪器有限公司；KDN一04C型凯氏定氮仪：浙江托普长寿果，而湖南产山核桃果仁出油率在5个品种中仪器有限公司。最高]。不饱和脂肪酸含量是判别食用油品质的重1．1．2原料与试剂要因素，彭湘莲等测定湖南山核桃油中质量分数野生山核桃籽粕：安江市绿色食品有限公司；碱92．16％是不饱和脂肪酸，单不饱和脂肪酸油酸又占性蛋白酶(BR)：上海如吉生

4、物科技发展有限公司；其大宗，高达68．03％。野生山核桃蛋白营养价值可考马斯亮蓝G一250：Amreso公司；牛血清蛋白(优级以与动物蛋白相媲美，富含多种氨基酸，其中必需纯)：Biosharp公司；硼酸、95％乙醇、NaOH、K2SO、无氨基酸含量相对于其他植物蛋白较高H]。野生山核水NaCO，、CuSO、H2SO等均为分析纯。桃仁蛋白颇具营养保健功能，有降低血液胆固醇、润1．2试验方法肠、开脾健胃等功效，在食疗界引起了广泛关注，极1．2．1样品处理具开发利用价值。目前对山核桃的研究还注重于油将野生

5、山核桃籽粕用万能粉碎机粉碎，置于恒脂方面，野生山核桃油、野生核桃仁、山核桃营养温干燥箱中4O℃干燥24h，过80目筛。粉，但山核桃蛋白质方面的研究动态还比较少[。1．2．2野生山核桃籽粕蛋白含量测定核桃的深加工中，核桃仁籽粕被丢弃，没有得到充采用微量凯氏定氮法(GB5009．5—2010)E8]，测得分利用，十分可惜]。投入对野生山核桃蛋白质的研其蛋白质含量为22．10％。究无疑对充分利用资源，提高其经济利用价值方面1．2．3提取工艺流程都有非常大的作用。为此，本试验立足于探索碱性蛋野生山核桃籽粕一

6、粉碎、过80目筛一加水配成白酶法对野生山核桃籽粕蛋白质的提取，通过响应l：12(g／mL)的固液比加入碱性蛋白酶一沸水浴15面法优化提取工艺。min灭酶一离心分离(4500r／min，30min)取上清液1材料与方法一定容一稀释一测定蛋白含量。1．2．4提取率计算1．1试验仪器和试剂考马斯亮蓝G一250法测定提取液蛋白质含量，1．1．1试验仪器蛋白提取率按下式计算。LXJ—IIB型离心机：上海安亭科学仪器厂；101一收稿日期：2014—03—24y=一山核桃籽粕蛋白质含量×100％基金项目：2013

7、年生物食品类专业学生创新训练中心创新项目(JDCX2013—04)。1．2．5单因素试验作者简介：冯妙，女，本科，研究方向为食品科学。通信作者：黄群，男，博士，副教授，研究方向为食品科学。在料液比1：12、pH为9．O、提取时间2．0h、温度S7第39卷2014年第3期冯妙等：响应面法优化碱性蛋白酶提取野生山核桃籽粕蛋白55℃不变的条件下，控制加酶量分别为1．O％、2．0％、提取率下降。因此碱性蛋白酶添加量为4．0％～6．0％3．0％、4．O％、5．0％、6．0％，进行单因素试验，考察加酶较适宜。量

8、对野生山核桃籽粕蛋白质提取率的影响。2．3pI-I值对提取率的影响在料液比1：12、加酶量3．0％、提取时问2．0h、温由图2可以看出，当pH在7．0～11．0时，野生山度55c【=不变的条件下，调整pH为7．0⋯809．0、10．0、核桃籽粕蛋白质的提取率增高趋势随pH的增加越11．0、12．0，分别进行单因素试验，考察pH对野生来越明显，显然，这是因为pH会改变碱性蛋白酶活山核桃籽粕蛋白质提取率的影响。性中心的空间构象，使酶蛋白中心活性部位的结合保持料液比1：12