百脉根高频再生体系建立和猪瘟病毒E2基因的遗传转化-论文.pdf

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1、第53卷第10期湖北农业科学Vo1．53No．102014年5月HubeiAgculturalSciencesMay．，2014百脉根高频再生体系建立和猪瘟病毒E2基因的遗传转化贾永红，孙艳香，张江丽，冯雪，袁晓圆，张冰(廊坊师范学院生命科学学院遗传育种研究所，河北廊坊065000)摘要：在建立百脉根(LotuscorniCU／atusL．)高频再生体系的基础上，通过农杆菌介导，将猪瘟病毒(CSFV)表面抗原E2基因转化进入百脉根，获得转基因阳性株系5个。并对遗传转化体系中关键性因素进行优化，结果表明，最优化体系为子叶预培养3d后，用为0．5±0．0

2、5的菌液侵染30min，共培养3d并添加AS(乙酰丁香酮)，选择培养基中卡那霉素浓度为50mg／L，可获得理想的转化效率。为抗猪瘟可食性疫苗的研制奠定基础关键词：百脉根(LotuscorniculatusL．)：高频再生；遗传转化中图分类号：Q78文献标识码：A文章编号：0439—8114(2014)10—2368—05EstablishingRegenerationSystemofLotuscorniculatusL．withHighFrequencyandGeneticTransformationofCSFVE2GeneJIAYong-hong，

3、SUNYan-xiang，ZHANGJiang-li，FENGXue，YUANXiao—yuan，ZHANGBing(CollegeofLifeScience，LangfangNormalCollege，Langfang065000，Hebei，China)Abstract：BasedontheestablishedregenerationsystemofLotuscorniculatusL．withhighfrequencyandmediatedbyAgrobacteriumtumefaciens，5linesoftransgenicLotusco

4、rniculatusL．withE2geneofclassicalswinefevervirus(CSFV)wereobtained．SeveralkeyfactorsaffectinggenetictransferringsystemwereoptimizedduringE2genetictransformation．Theresultsshowedthattheoptimalsystemwaspre—cuhivatedcotyledonfor3daysandinfectedwithAgrobacteriumattheconcentrationof

5、0D600mn=0．5+0．05about30min．AfterCO—culturedfor3days，100p．mol／LASwasaddedinctilturemediumcontaining50mg／LKanamycin．Underthissystem，idealeficiencyofgenetictransformationwasachieved．Itwilllayafoundationforediblevaccineofresistingswinefever．Keywords：LotuscorniculatusL．：highfrequenc

6、yregeneration；genetictransformation百脉根(L0tusc0rniculatusL．)是世界上广泛栽毒表面抗原基因为外源基因．以农杆菌介导方培的多年生优良豆科牧草之一．在水土保持和牧场法实施百脉根为转基因受体的遗传转化．以期为抗改良等方面也有独特的作用百脉根细胞全能性猪瘟转基因可食性疫苗的研制提供参考方案。强．容易获得高频再生植株．遗传转化率相对较高、1材料与方法转基因植株生长速度快I1'2一．是植物转基因和生物固氮机理等研究的良好材料近年来植物作为生物外1．1材料源蛋白的天然生物反应器生产可食性疫苗和植物1．1．1植

7、物材料供试百脉根：暖季型．购至上海春抗体的研究已取得了可喜的进展．引导着国际疫苗茵种业有限公司。含E2外源基因的根癌农杆菌菌研制开发的新潮流_3．5]．而基因作为外源基因研株EHA105(pGN—E2)．其中pGN载体由南开大学制抗猪瘟转基因疫苗尚属有限_6．73．本研究以猪瘟病白艳玲老师提供。收稿日期：2014—01—1O基金项目：廊坊师范学院自然科学基金项目(LSZY201105)；廊坊师范学院大学生创新创业训练计划项目(201310100007)；廊坊师范学院生命科学学院“本科生参与研究性项目”(SKCYZ201302)作者简介：贾永红(196

8、9一)，男，内蒙古武川人，副教授，主要从事遗传学和分子生物学教学与研究工作，(电话)0316—2188392