双链RNA快速小量提取法在水稻dsRNA病毒病诊断中的应用.pdf

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1、贵州农业科学2014，42(I)：26～28GuizhouAgriculturalSciences[文章编号]10013601(2014)0卜0007—0026—03双链RNA快速小量提取法在水稻dsRNA病毒病诊断中的应用郭灵芳，刘小娟。，吴祖建。，章松柏3(1．长江大学工程技术学院，湖北荆州434020；2．长江大学农学院，湖北荆州434025；3．福建农林大学植物病毒研究所，福建福州350002)[摘要]水稻病毒病是水稻生产中重要的病害，目前国内流行的水稻病毒病病原多为dsRNA病毒，每一种ds

2、RNA病毒都有特异性基因图谱，为此，探讨了双链RNA快速小量提取法在水稻dsRNA病毒病诊断中的应用。结果表明：1)双链RNA快速小量提取法可以从0．5～0．8g的水稻组织中快速提取dsRNA，在3h内完成对样品的鉴定，提取产物可以直接应用于dsRNA的检测、分类以及相关基因的克隆；2)提取效率较传统方法高，以sRBSDV为例，传统dsRNA提取方法中dsRNA的产率为0．15～0．3g／g，该方法中dsRNA的产率茎组织达到3／*g／g以上，叶组织0．1～0．5#g／g；3)该方法也可以应用于介体体

3、内的dsRNA病毒基因组核酸的提取。[关键词]双链RNA；dsRNA病毒；快速小量提取法；水稻[中图分类号]$432．41[文献标识码]AApplicationofRapidSmalIExtractionMethodonDetectingRicedsRNAVirusesGUOLingfang，LIUXiaojuan。，WUZujian。，ZHANGSonghai。'。(1．CollegeofTechnology&Engineering，YangtzeUniversity，Jingzhou，Hubei4

4、34020；2．CollegeofAgriculture，YangtzeUniversity，dingzhou，Hubei434025；3．InstituteofPlantVirology，FujianAgricultureandForestryUniversity，Fuzhou，Fujian350002，China)Abstract：Ricevirusdiseasewasanimportantdiseaseinriceproduction，mostofthemweredsRNAviruseswith

5、characteristicdsRNAgenomeprofiles．Basedonthat，therapidsmal1extractionmethodwasexploredtoapplyinthediagnosisofdsRNAvirusesofricedisease．Results：1)bvthemethod，0．5～O．8gsamplewasrequiredtorapidlyextractdsRNAwithin3h，andthedsRNAscouldbedirectlyusedtothedetec

6、tionandclassificationofdsRNAvirusesandthecloneofrelatedgenes；2)Theextractionefficiencywashigherthantraditionalmethod，takingSRBSDVasanexample，theproductiverateofdsRNAwas0．15-0．3>g／g，whileitwasmorethan3／,g／gfromstemtissueand0．1～O．5g／gfromleaftissuebythera

7、pidsmallextractionmethod：3)ThemethodcouldalsobeusedtothedsRNAsextractionfrominsectvectors．Keywords：dsRNA；dsRNAvirus；rapidsmal1extractionmethod；rice正常的植物体内很难检测到双链RNA(doub—virus)、RBSDV(Riceblack—streakeddwarfvirus)、le—strandedRNA，dsRNA)的存在j。任何导致正SRBSDV(So

8、uthernriceblack—streakeddwarfvi—常机体dsRNA形成的情况都会引起相应基因的沉rus)、RGDV(Ricegalldwarfvirus)等。每一种水寂，这是寄主的dsRNA切割酶(Dicer酶)切割的结稻dsRNA病毒都有特异性基因图谱，因此，可以借果l_6J，所以正常机体内各种基因有效表达需要一套助特异的dsRNA基因组图谱快速鉴定水稻病毒病严密防止dsRNA形成的机制[2-3]。但是植物遭受病原，而不需要经过RT—PC