提取方法、试剂对不同高等植物叶片叶绿素提取效果的比较分析-论文.pdf

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1、第14卷第2期潍坊学院学报Vo1．14No．22014年4月JournalofWeifangUniversityApr．2014提取方法、试剂对不同高等植物叶片叶绿素提取效果的比较分析刘彩云'(1．山东省高校生物化学与分子生物学重点实验室，山东潍坊261061；2．潍坊学院，山东潍坊261061)摘要：分别采用浸泡法和研磨法，比较分析了7种混合试剂对烟草、油菜和毛白杨叶片叶绿素的提取效果。结果表明，7种提取试剂采用研磨法对三种供试植物叶片叶绿素的提取效果均优于浸泡法，其中体积比为4．5：4．5：1的无水乙醇、丙酮和水的混合液研磨提取效果最好。关键

2、词：高等植物；叶绿素提取；比较分析中图分类号：Q94文献标志码：A文章编号：1671—4288(2014)O2—0074—03叶绿素是植物体重要的色素分子，也是植物叶色、生长状况的重要外在指标。因此，在植物学、植物生理学等学科领域，叶绿素的提取及其定量分析是一个常用的实验环节。目前对叶绿素的提取通常采用浸泡法和研磨法口]，提取试剂主要有乙醇、丙酮、石油醚、二甲基亚枫等有机溶剂或者其混合液，但具体试验研究中，各种提取试剂的配制比例、提取方法不尽相同¨3-7]，且未有文献对其进行系统地比较分析。介于此，本研究选用烟草、油菜和毛白杨新鲜叶片为供试植物材

3、料，比较分析了已有文献报道的几种叶绿素提取混合试剂对叶绿素的提取效果，以期为高等植物叶绿素的有效提取提供参考。1材料与方法1_1供试植物供试烟草、油菜叶片采自潍坊学院试验田，毛白杨叶片采自潍坊学院校园绿化植物。1．2提取试剂以目前已有文献报道的7种有机溶剂混合液为提取试剂]，分别采用研磨和浸泡的方法对3种供试植物新鲜叶片组织中叶绿素含量进行了提取和定量分析。这7种提取试剂分别是(1)809／6丙酮，(2)95乙醇，(3)95乙醇和8ooA的丙酮混合液(体积比为1：1)，(4)无水乙醇和丙酮混合液(体积比为1：1)，(5)95丙酮一乙醇(体积比为2

4、：1的丙酮、无水乙醇混合液用水稀释至95)，(6)乙醇一丙酮混合液(无水乙醇、丙酮、水的体积比为4．5：4．5：1)，(7)石油醚和8O9／6的丙酮混合液(体积比为1：1)。1．3提取方法1．3．1浸泡法随机取10个植株中部叶片各1片，去除叶脉，剪碎混匀后，称取0．3g放入30ml三角瓶中，加入提取试剂10ml，使叶片完全浸入提取液中，封口膜封口置于30~C条件下暗培养24h。每种供试植物叶片分别设上述7种提取试剂处理，每个处理设3个重复。1．3．2研磨法随机取1O个植株中部叶片各1片，去除叶脉，剪碎混匀后称取0．3g，加入5mL提取试剂，冰浴研

5、磨，匀浆用滤纸过滤，并用研磨所用的试剂将滤纸上残留匀浆冲洗干净，最后定容至lOml。每种供试植物叶片分别设上述7种提取试剂处理，每个处理设3个重复。*收稿日期：2013—05—10基金项目：山东省高校科技发展计划项目(J12LE54)作者简介：刘彩云(1975一)，女，甘肃宁县人，潍坊学院生物与农业工程学院讲师，博士。研究方向：植物抗病育种及植物病生理研究。74—第2期刘彩云：提取方法、试剂对不同高等植物叶片叶绿素提取效果的比较分析1．4叶绿素含量的测定、计算分别以提取试剂为空白对照，采用723C型可见分光光度计测定各提取液在645、663处的吸

6、光度值，根据Arnon法公式计算各提取液中叶绿素含量。2结果与分析7种提取试剂分别采用浸泡法和研磨法对烟草、油菜和毛白杨叶片叶绿素的提取效果如图1、图2、图3所示。由图1、图2、图3可见，相同量的烟草、油菜和毛白杨叶片组织，7种提取试剂采用研磨法的提取效果均优于浸泡法，但差别不明显。采用体积比为4．5：4．5：1的无水乙醇、丙酮和水混合液研磨提取的叶绿素含量在三种供试植物材料中均最高，其次是体积比为2：1的丙酮一无水乙醇与水配制成的95％混合液。，25誉2015加105套0(1)(2)(3)(4)(5)(6)(7)不同提取试剂图1烟草叶片叶绿素的

7、提取效果25，、誉20衄11510玛i}50(1)(2)(3)(4)(5)(6)(7)不同提取试剂图2油菜叶片叶绿素的提取效果30酱252015慨1O蜡-&-50(1)(2)(3)(4)(5)(6)(7)不同提取试剂图3毛白杨叶片叶绿素的提取效果3结论与讨论叶绿素提取采用的浸泡法操作简单，但耗时较长。研磨法操作费力，但是省时，可以即研即测。本研究中，7种提取试剂对三种供试植物叶片采用研磨法的提取效果均优于浸泡法，但二者差异不明显。这表明，如果待提取植物材料量较少，可采用研磨方法。但由于叶绿素见光容易分解，加上研磨工作量较大，因一75—潍坊学院学报

8、2014年4月此，大批量样品的提取不宜采用此方法。本研究选用烟草、油菜和毛白杨叶片作为供试植物材料，是因为烟草和油菜叶片质地均较柔嫩，但