两种叶绿素提取方法比较

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1、两种叶绿素提取方法比较　　摘要：以5种植物叶片为试验材料，采用分光光度法研究了4种提取溶剂及两种提取方法对植物叶片叶绿素提取量的影响。结果表明，两种提取方法中，丙酮与乙醇的混合溶剂提取整体上好于丙酮、乙醇单独提取的效果；浸提法中，浸提时间为18h和24h效果较好，且浸提时间的增加降低了提取溶剂的影响。生产上采用混合溶剂提取时，浸提18h是较为理想的选择。关键词：叶绿素；提取方法；比较分析中图分类号：Q244；TS202.3文献标识码：A文章编号：0439-8114（2013）21-5303-02ComparativeAna

2、lysisofTwoExtractionMethodsofChlorophyllXUXin-juan，LIYong-chao，ZHANGShang-pan，SHENQi，ZHANGZhen-guo（HenanInstituteofScienceandTechnology，Xinxiang453003，Henan，China）Abstract：Withfiveplantleavesastheexperimentalmaterial，theeffectsoffourextractionsolventsandtwoextract

3、ionmethodsonchlorophyllcontentwerestudiedbyspectrophotometry.The4resultsshowedthattheextractionefficienciesofchlorophyllusingmixedsolventwerebetterthanusingacetoneorethanolalone.Theresultswerebetterwiththeextractiontime18hand24h，respectively，andtheeffectofextracti

4、onsolventwasreducedwithincreasingextractiontime.Inproduction，extractiontimeof18hisanidealchoicewithmixedsolventasextractionsolvent.Keywords：chlorophyll；extractionmethods；comparativeanalysis植物叶片叶绿素含量与光合作用关系密切，叶绿素含量的测定无论是在生理上还是在选育品种以及抗性研究等方面都很有必要性。分光光度法是测定叶绿素含量的经典方法

5、，传统的叶绿素提取方法为研磨法，即植物材料经过研磨、过滤或离心、定容后再进行比色测定4，整个过程繁琐且误差较大，操作中还易受光氧化的破坏，不适于对田间大量样品的测定和大量叶绿素的提取，也不适合大批量样本的应急检测。随后提出的浸提法采用溶剂浸泡叶片的方法将叶绿素萃取出来，然后进行比色测定。直接浸提植物叶样并测定叶绿素提取量，免除了传统提取中研磨、离心过滤等繁琐手续，方法简单易行、效率高，且减少了误差来源，稳定性好。王元军[1]研究指出，研磨法提取黑豆芽菜叶绿素的效果好于浸提法，但很多植物上的应用结果显示浸提法比研磨法提取叶绿

6、素效率更高且稳定性好[2-4]。但浸提法受多种提取试剂的影响，并且浸提时间的长短也影响最终的测定结果。因此，本研究以5种植物叶片为试验材料，采用4种不同的溶剂分别用研磨法和浸提法提取叶绿素，测定叶绿素提取量，研究浸提溶剂及浸提时间对叶绿素提取量的影响，并对浸提法和研磨法两种提取叶绿素的方法进行比较，以期为植物叶绿素的提取和测定提供参考依据。1材料与方法1.1材料供试材料为玉米、大豆、棉花、三叶草、爬山虎的叶片，均取自河南科技学院试验田。丙酮、95%乙醇及无水乙醇均为分析纯试剂。1.2方法提取溶剂设80%丙酮、95%乙醇、混

7、合溶剂Ⅰ（V丙酮∶V无水乙醇=1∶1）、混合溶剂Ⅱ（V丙酮∶V无水乙醇=2∶1）。选择正常生长的新鲜健全植物叶片，用纱布擦净表明污物，避开主脉进行取样。剪碎后称取约0.20g，一组用不同溶剂研磨并定容至25mL，过滤后分别测定提取液在663nm和645nm处的吸光度；另一组用不同溶剂直接浸提，浸提时间为6、12、18和24h，然后测定浸提液在663nm和6454nm处的吸光度。每次测定3次重复。采用Arnon公式计算叶绿素含量：叶绿素a含量（Chla，mg/g）=（12.7×A663nm-2.69×A645nm）×V/10

8、00×W叶绿素b含量（Chlb，mg/g）=（22.9×A645nm-4.68×A663nm）×V/1000×W叶绿素总含量（Chla+Chlb，mg/g）=（8.02×A663nm+20.21×A645nm）×V/1000×W式中，A663nm、A645nm分别为相应波长下叶绿素提取液的吸光度，V为提