叶绿素的提取

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1、叶绿体中色素的提取和分离一、实验目的掌握叶绿体色素的提取方法；掌握纸层析法分离叶绿体色素的原理和步骤；掌握叶绿体色素的部分理化性质。二、实验原理1.叶绿体中的色素能溶解在丙酮（有机溶剂:酒精、汽油、苯、石油醚等）中，所以用丙酮可提取叶绿体中色素。2.色素在层析液中溶解度不同，溶解度高的色素分子随层析液在滤纸条上的扩散得快，溶解度低的色素分子随层析液在滤纸条上的扩散得慢，因而可用层析液将不同的色素分离。四种色素的化学性质均为亲脂性>亲水性：均不溶于水，而溶于有机溶剂，故可用乙醇、丙酮等有机溶剂提取。极性大小：叶绿素b>叶绿素a>叶黄素>胡萝卜素根据相似相溶原理，在有机溶

2、液中的溶解度：叶绿素b<叶绿素a<叶黄素<胡萝卜素三、叶绿素的光学性质叶绿素与类胡萝卜素都具有光学活性，表现出一定的吸收光谱，可用分光光度计精确测定。四、实验材料与试剂新鲜的菠菜叶片。95%乙醇、CaCO3、醋酸铜结晶、浓盐酸、汽油。量筒，滤纸，大培养皿一只，小培养皿一只，长滴管，剪刀。五.实验步骤1.提取叶绿素研磨法提取光合色素材料剪碎研磨法加入有机溶剂研磨、匀浆过滤提取液将深绿色的菠菜叶剪碎放入研钵中。放入少量的SiO2和CaCO3，再加入3滴管无水乙醇后迅速、充分研磨至糊状。将糊状研磨物倒入放有尼龙布的漏斗中，用研钵锤挤压，将滤液收集到小玻璃瓶中，并盖上瓶盖。具

3、体实验步骤（提取色素）2、叶绿体色素的分离——（纸层析法）用滤纸条浸色素提取液（试管1），吹干，反复多次；将带色素的滤纸条卷成灯芯，将表面皿放在培养皿内，注上汽油，把灯芯浸在汽油内，加盖，色素层分清后，取下吹干，即可看到分离的各种色素。实验关键1.选材时应注意选择鲜嫩、色浓绿、无浆汁的叶片。如菠菜叶、棉花叶、洋槐叶等。2.画滤液细线时应以细、齐、直为标准，重复画线时必须等上次画线干燥后再进行，重复2-3次。3.层析时不要让滤液细线触及层析液。1.因丙酮和层析液都是易挥发且有一定毒性的有机溶剂，所以研磨要快，收集的滤液要用棉塞塞住，层析时要加盖，尽量减少有机溶剂的挥发。

4、2.在研磨时要加少许二氧化硅，目的是为了研磨充分，有利于色素的提取；加少许碳酸钙的目的是为了防止研磨过程中，叶绿体中的色素受到破坏。3.分离色素时，一定不要让滤纸条上的滤液细线接触到层析液，这是因为色素易溶解在层析液中，导致色素带不清晰，影响实验效果。注意事项叶绿体中色素的提取和分离实验结果（西安交通大学实验报告纸）（写清姓名、班级、实验名称、日期等）一、实验目的二、实验原理三、实验记录1.讲义中的表格（改动见下页）2.画图四、讨论及思考题1.谈谈你在实验过程中的成功经验，或失败的教训2.思考题实验报告思考题1.研磨时要使叶绿素能够提取出来，要破坏多少层膜？2.滤纸剪

5、角的目的是什么？3.到了秋天叶色变黄、变红的原因是什么？叶绿体中色素的提取和分离