不同液化处理及核酸共提取方法对痰样本中病毒核酸的提取效果比较.pdf

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1、万方数据国际流行病学传染病学杂志2016年4月第43卷第2期InterJEpidemiolInfectDis'April2016，V01．43．No．2不同液化处理及核酸共提取方法对痰样本中病毒核酸的提取效果比较何慧陈懿潘平潘富根余道军310006杭州，浙江中医药大学附属杭州第一医院检验科，杭州市第一人民医院检验科(何慧、陈懿、潘平、余道军)；322000浙江义鸟，浙江大学医学院附属第四医院检验科(潘富根)通信作者：余道军，Email：yudaojun98@163．comDOI：10．3760／

2、cma．j．issn．1673-4149．2016．02．003【摘要】目的比较不同痰液液化方法及不同核酸提取方法共提取痰液中病毒RNA和DNA的效果，并比较其优劣。方法将痰液样本分为二硫苏糖醇(DTr)、氢氧化钠(NaOH)液化痰液组，以生理盐水为对照，分别使用TlANampVirusDNMRNAKit(方法1)、KBW酶法(方法2)、KBW通用法(方法3)和单一核酸提取试剂盒(方法4)提取核酸，微量核酸分析仪检测核酸纯度，多重定量PCR方法检测核酸的浓度。结果核酸纯度测定结果：生理盐水组中方

3、法2和方法3，DTr处理组中方法l和方法2，NaOH处理组中方法3所提DNA纯度略大于1．8；各组中采用方法1所提RNA纯度均明显超过2，方法4及NaOH处理组中方法3所提RNA纯度均低于1．8，其余纯度均在正常范围内。PCR浓度测定结果：腺病毒(DNA)Ct值：生理盐水组0．05)；提取方法l<方法3(g=12。68,P<0．05)，方法1、方法2与方法4之间差异无统计学意义(

4、q=0．84、1．69、2．53，P>0．05)；呼吸道合胞病毒(RNA)Ct值：生理盐水组0．05)。结论痰液液化前处理会影响病毒RNA和DNA的共提取，TIANampVirusDNMRNAKit和KBW酶法对痰样本中病毒核酸共提取效果较好。【关键词】痰；痰液液化；核酸共提取；多重定量PCR；腺病毒；呼吸道合胞病毒

5、基金项目：浙江省医药卫生科技计划项目(2015ZDA025)；杭州市科技发展计划(20130733Q04)；杭州市卫生科技计划重大项目(2012zD001)EffectsofdifferenthomogenizationandnucleicacidCO-extractionmethodsonviralRNAandDNAextrac-tionfromsputumHeHui，ChenYi，Pan只愕，PanFugen，YuDaojunMedicalLaboratory，theFirstAJ毋lica

6、tedHospitalofHangzhou，ZhejiangChineseMedicalUniversity，HangzhouFirstPeople!sHospital．Hangzhou310006，China(HeH。ChenY，P弧P。YuDn；MedicalLaboratory，theFourthAffiliatedHospital，ghejiangUn&ers毋Schoolof胁如妇，Yiwu322000，ghejiang，China(PanFG)Correspondingauthor：

7、YuD晒un，Email：yudaojun98@163．com【Abstract]ObjectiveToevaluatetheeffectsofdifferenthomogenizationandnucleicacidCO·extractionmethodsonviralRNAandDNACO-extractionfromsputum．MethodsSputumwasliquefiedbyO．1％Dithiothreitol(DTF)(groupB)and4％NaOH(groupC)respec

8、tively，comparingwithsalinesolutions(groupA)．TIANampVirusDNA／RNAKit(method1)，KBWenzymekit(method2)，KBWuniveralkit(method3)andTAKARAextractionkit(method4)wereusedtoextractnucleicacidfromeachgroup．Thepurityofnucleicacidextractedbydifferentmethodswaseval