颗粒裂解肽g13结构域在大肠杆菌中的高效融合表达

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1、眉题2颗粒裂解肽G13结构域在大肠杆菌中的高效融合表达刘小强,查向东,肖亚中,杨金环,李能树安徽大学生命科学学院安徽省生态工程与生物技术重点实验室,合肥230039摘要:为高效表达颗粒裂解肽G13结构域并避免G13对宿主菌的毒性,将人工合成的编码G13的基因片段,PCR扩增后克隆于原核表达载体pThioHisA中,构建了重组表达载体pThioHisA-G13,将其转化于大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导表达融合蛋白Trx-G13,表达产物以包涵体的形式存在,其表达量约占细菌总蛋白的58%。包

2、涵体蛋白经8mol/L尿素溶解后,再经CNBr切割,阳离子交换层析,得到纯化的重组G13结构域。琼脂糖扩散法检测表明重组G13结构域多肽具有抗菌活性。关键词:颗粒裂解肽,G13结构域,融合表达,阳离子抗菌肽EfficientfusionexpressionofG13domainderivedfromgranulysininEscherichiacoliXiaoqiangLiu,XiangdongZha,YazhongXiao,JinhuanYang,andNengshuLiKeyLaboratoryo

3、fEcologicalEngineeringandBiotechnologyofAnhuiProvince,SchoolofLifeScience,AnhuiUniversity,Hefei230039,ChinaAbstract:TheG13domainderivedfromgranulysinshowshighantimicrobialactivitiesagainstGram-positiveandGram-negativebacteriabutdoesnotlyseJurkatcellsorl

4、iposomes.ToexploreanewapproachforhighexpressionoftheG13domain,wefusedthesequenceencodingG13tothioredoxin(Trx)genetoconstructtherecombinantexpressionvector(pThioHisA-G13).Acyanogenbromide(CNBr)cleavagesitewasintroducedbetweentheTrxandG13tofacilitatefinal

5、releaseoftherecombinantG13.Therecombinantexpressionvector,pThioHisA-G13,wastransformedintoE.coliBL21(DE3).UponinductionbyIPTG,Trx-G13fusionproteinwasexpressedandtooktheformofinclusionbodiescounting58%(W/W)oftotalcellularproteins.Theinclusionbodywassolve

6、dbyurea(8mol/L)andthencleavedbyCNBr.WepurifiedtherecombinantpeptideG13byone-stepcationexchangechromatography.ResultsofagarosediffuseassayanalysisindicatedthattherecombinantG13exhibitedantibacterialactivity.Theproceduredescribedinthisstudywillprovidearel

7、iableandsimplemethodforhighlyefficientproductionofsomecationicantimicrobialpeptides.Keywords:Granulysin,G13domain,fusionexpression,cationicantimicrobialpeptideJournals.im.ac.cn刘小强等:颗粒裂解肽G13结构域在大肠杆菌中的高效融合表达243抗菌肽(Antimicrobialpeptide)是生物体内产生的一种阳离子小分子多肽,广

8、泛存在于植物和动物体内,是天然免疫防御系统的一部分[1]。当前,抗生素的大量使用导致耐药性菌株的产生,Journals.im.ac.cn刘小强等:颗粒裂解肽G13结构域在大肠杆菌中的高效融合表达243因而开发新型抗生素显得越来越重要。抗菌肽是通过物理作用造成细胞膜的穿孔而达到广谱抗菌的效果,所以不容易导致耐药性菌株的产生和交叉抗性反应,被认为是抗生素的替代品和增效剂[2],其潜在的价值已经受到人们的广泛关注。颗粒裂解肽(Granulysin)是细胞毒性淋