第二章 饲用益生菌的研究 88

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1、第二章饲用益生菌的研究88第一节饲用益生菌的筛选882.1.1益生菌的作用882.1.2益生菌筛选方法882.1.3益生菌筛选结果88第二节饲用益生菌的益生菌的鉴定1022.2.1零排放II号益生菌的形态学1022.2.2零排放II号益生菌的生理生化特性1032.2.3零排放II号益生菌的脂肪酸鉴定1052.2.4零排放II号益生菌的分子鉴定106第三节饲用益生菌的生物学特性1022.3.1零排放II号益生菌的生长曲线1022.3.2零排放II号益生菌的碳氮营养需求1032.3.3零排放II号益

2、生菌的矿物营养需求1052.2.4零排放II号益生菌的最适生长温度106第四节饲用益生菌的拮抗特性1092.4.1零排放II号益生菌对靶标大肠杆菌的对峙作用1092.4.2零排放II号益生菌对靶标大肠杆菌的抑制效应1102.4.3零排放II号益生菌胞外抑菌物的测定1112.4.4作用浓度对零排放II号益生菌拮抗能力的影响1122.4.5培养时间对零排放II号益生菌拮抗能力的影响1142.4.6培养基pH值对零排放II号益生菌拮抗能力的影响1162.4.7发酵转速对零排放II号益生菌拮抗能力的影响

3、1172.4.8零排放II号益生菌对靶标大肠杆菌拮抗能力的讨论119第五节饲用益生菌的作用机理1202.5.1关于细菌病原动力学1202.5.2零排放II号益生菌在小白鼠体内定殖特性1232.5.3零排放II号益生菌对小白鼠毒力的时间动力学模型1262.5.4零排放II号益生菌对小白鼠毒力的浓度动力学模型1272.5.5零排放II号益生菌对小白鼠促长作用的动力学模型1292.5.6零排放II号益生菌对感染K88的小白鼠控病模型1322.5.7零排放II号益生菌对鸡免疫功能的影响138第六节零排放

4、II号益生菌的动物饲养应用1412.6.1零排放II号益生菌在鸡饲养中的应用1412.6.2零排放II号益生菌对鸡的防病效果1422.6.3零排放II号益生菌对鸡的增重效果1432.6.4零排放II号益生菌对鸡肉料比的影响144第二章饲用益生菌的研究第一节饲用益生菌的筛选2.1.1益生菌的作用随着科学的发展和认识的深入，人们对抗生素和化学药物带来的副作用有了更深刻的认识。首先，抗生素的使用会破坏正常微生物的生态平衡，引起菌群失调。其次，抗生素的长期使用会促进细菌耐药性增加，然后通过R因子发生耐药

5、性传递，使耐药菌株增加，并有可能转移到人体，威胁人类健康。同时大量使用抗生素造成畜禽产品中的药物残留也会严重影响人类健康。因此欧美许多国家已对抗生素的使用作出了许多限制。为保证畜禽的生产性能与健康状况，抗生素替代品的研究已成为各国动物营养学界研究的热点，其中在微生态理论的基础上发展而来活菌制剂、微生物培养物、微生态制剂是最理想的无毒副作用的抗生素替代品。益生素，又称益生菌、促生素、利生剂、活菌制剂或微生态制剂等，是指摄入动物体内、参与肠内微生物平衡的活性微生物培养物。益生素能够通过直接增强动物对

6、肠内有害微生物群落的抑制作用。或者通过增强非特异性免疫功能来预防疾病，并间接起到促进动物生长和提高饲料转化率的作用。众多试验证实了益生素具有提高增重、改善饲料转化效率、促进畜禽机体免疫功能、降低死亡率及改善环境等效果。目前使用的益生素主要是芽孢杆菌、乳酸杆菌、粪链球菌等单一菌种或复合菌种的制剂。2.1.2益生菌筛选方法从畜禽肠道、土壤、特殊生境集样品分离出的微生物（主要为芽孢杆菌）中，以肠道病原菌为靶标筛选有益微生物，作为益生素菌种的资源，以便进一步复筛测定。靶标菌株：Ⅰ：猪大肠杆菌，编号K88

7、；Ⅱ：鸡大肠杆菌（畜牧所提供）；Ⅲ：沙氏门菌。供试菌株：选自农业生物资源研究所菌种资源库中的107株细菌，以零排放II号益生菌，地衣芽孢杆菌BS-2000作为对照菌（？）。靶标菌株活化：-70℃保存的靶标菌株（猪大肠杆菌K88、鸡大肠杆菌、沙氏门菌）于NA平板上活化，37℃培养24h。然后挑取一环接种于装瓶量为1/5LB液体培养基中，37℃、170rpm恒温摇床振荡培养，24h后取样，用血球计数板计算培养液的菌体浓度，并将菌液浓度调整为8×106cfu/ml浓度的孢子悬浮液。供试菌株活化：-70

8、℃保存的107个芽孢杆菌菌株于NA平板上活化，30℃培养24h。然后挑取一环接种于装瓶量为1/5LB液体培养基中，30℃、170rpm恒温摇床振荡培养，48h后取样，用血球计数板计算培养液的菌体浓度，并将菌液浓度调整为8×106cfu/ml浓度的孢子悬浮液。采用对峙试验进行生防菌的初筛：按图2的涂板方式，将益生菌划竖线，从益生菌边缘但不接触，分别垂直向外划横线接种靶标菌（靶标菌从上至下依次为，Ⅰ：猪大肠杆菌K88，Ⅱ：鸡大肠杆菌，Ⅲ：沙氏门菌）。用无菌蒸馏水作对照，每个处理重复3次，在37℃暗培