饲用益生菌的筛选及其菌剂制备技术研究

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1、分类号:密级：UDC：学号：405604812108南昌大学硕士研究生学位论文饲用益生菌的筛选及其菌剂制备技术研究ScreeningandPhysiologicalFunctionofForageProbioticBacteria邓耀军培养单位（院、系）：食品学院食品科学与工程系指导教师姓名、职称：熊涛教授申请学位的学科门类：工学类学科专业名称：食品科学论文答辩日期：2015年5月2015年05月30日一、学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和

2、致谢的地方外，论文中不包含其他人己经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得南昌大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名（f-写）:签字丨-:丨期：wr年以月c〇n二、学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解南昌大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权南昌大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制

3、手段保存、汇编本学位论文。同时授权北京万方数据股份有限公司和中国学术期刊（光盘版）电子杂志社将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》和《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》中全文发表，并通过网络向社会公众提供信息服务，N意按“章程”规定享受相关权益。学位论文作者签名（手写）：文fg$导师签名（手写）：签字F1期：A/r年以月〇州签字R期：，/$"年0'月〇1円论文题目姓名学号4巧知辦/刀论文级别博士□硕士a院/系/所专业4飞魏Email备注：5/公开□保密（向校学位办申请获批准为“保密”，______年_月后公幵)摘要摘要罗伊

4、氏乳杆菌作为一种重要的动物微生态制剂中的益生菌，其菌体本身及代谢产物能够抑制仔猪肠道过路菌和病原菌的粘附及生长，因此能够提高仔猪的免疫力和降低仔猪死亡率，从而大大的改善了养殖行业的质量。本课题是从畜禽粪便中有针对性、目的性地筛选出产酸菌株，且对其进行体外性能评价。主要研究如下：（1）饲用益生菌的筛选。经过初筛及耐酸耐胆盐复筛，从仔猪粪便中筛选出三株产酸菌株，通过菌体特征、糖发酵等生理生化实验以及分子生物学鉴定，最后确定其为罗伊氏乳杆菌，且其中耐受性最强的为NCU801。（2）NCU801生长曲线绘制。罗伊氏乳杆菌NCU801属于

5、异型发酵，能够利用葡萄糖代谢产生乳酸、乙酸，同时还能够产生乙醇、二氧化碳等，0-4h、4-16h、16-24h及24h后分别为延滞期、对数期、稳定期和衰亡期。（3）NCU801的动物胃肠道耐受性能研究。L.reuteriNCU801在pH2.5动物胃液时，菌株D值大于60min；通过模拟动物肠液耐受性实验，菌体在肠液作用4h后，存活率仍有38.6%。在胆盐浓度为0.3%的改良MRS培养基中作用524h后，活菌数下降一个多数量级，但活菌数仍有9.7×10CFU/mL。可见，L.reuteriNCU801具有较强抵抗动物胃肠道逆环境

6、的能力。（4）NCU801的抑菌性能研究。通过对肠道中常见的9种致病菌的抑菌实验，发现罗伊氏乳杆菌NCU801的菌体、发酵液和无菌上清液均具有抑菌性，且发酵液和发酵液的无菌上清液的抑菌效果较菌体更强，其中发酵液和无菌上清液对大肠埃希氏菌抑制作用最强，抑菌圈直径达18mm以上，由此可以判断出罗伊氏乳杆菌NCU801的抑菌作用主要依赖于本身的代谢产物。（5）NCU801肠道粘附性能研究。NCU801对Caco-2细胞的粘附，其粘附指数同菌体浓度、菌体发酵时间、孵化时间及pH值都有对应的关系；而NCU801对Caco-2细胞粘附指数最

7、大值达（5.08±0.15）CFU/cell。NCU801活菌、死菌均能在置换、竞争和排斥性的抑制病原菌对Caco-2细胞粘附；其中抑制粘附作用最大的为活菌悬液对大肠杆菌排斥粘附抑制，抑制粘附率达86.8±4.5（%）。（6）NCU801高密度培养条件研究。通过单因素试验，确定了L.reuteriNCU801最佳碳源、氮源、缓冲盐、无机盐离子分别为葡萄糖、牛肉膏和酵母I摘要2+膏、NaAc、Mg；而正交试验优化的培养基配方为：牛肉膏1.5%，酵母膏1.5%，葡萄糖5%，MgSO40.06%，MnSO40.01%，NaCl0.00

8、1%，K2HPO40.2%，柠檬9三铵0.2%，CH3COONa0.3%。菌液浓度达1.3×10CFU/mL。关键词：罗伊氏乳杆菌；选育；胃肠道耐受性；抑菌性能；粘附性；粘附抑制性IIABSTRACTABSTRACTLactobacillusreuteriiso