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1、分类号Q513+.5学校代码10129UDC579学号08201065重组金黄色葡萄球菌次黄嘌呤单核苷酸脱氢酶与脂蛋白(a)的相互作用TheInteractionBetweenLipoprotein(a)andRecombinantInosine5'-monophosphateDehydrogenasederivedfromStaphylococcusaureus申请人：许颖学科门类：农学学科专业：预防兽医学研究方向：兽医微生物与免疫学指导教师：韩润林教授论文提交日期：二〇一一年四月摘要金黄色葡萄球菌(S.aureus)表面
2、的纤溶酶原受体能够与宿主纤溶酶原(Plg)结合,此外,与病菌结合的Plg可以在宿主或病菌的Plg激活剂的作用下转变为纤溶酶(Pm),从而协助S.aureus穿越宿主组织屏障,达到深层入侵的目的。次黄嘌呤单核苷酸脱氢酶(IMPDH)是S.aureus表面的纤溶酶原(Plg)受体之一,它可以与Plg的赖氨酸结合位点(LBS)相结合。脂蛋白(a)中的载脂蛋白(a)[Apo(a)]与Plg有很高的同源性,且两者的Kringle结构域都含有LBS,其中Apo(a)的KIV10含有高亲和力的LBS。因此本实验提出了Lp(a)可以与S.a
3、ureus表面的Plg受体相结合,进而可能竞争性抑制S.aureus与Plg结合的假说,目前已经证明了Lp(a)可以与S.aureus表面的Plg受体之一α-烯醇化酶(α-enolase)相结合。本研究对S.aureus表面的另外一种Plg受体IMPDH与Lp(a)的相互作用进行了研究,首先克隆了S.aureusCMCC26003的IMPDH基因,酶切后将其连接到表达载体pASK-IBA37中,并在大肠杆菌BL−21中表达了该重组蛋白(rIMPDH)。通过酶联免疫吸附试验(ELISA)、亲和色谱层析及Westernblot对
4、rIMPDH与Lp(a)的相互作用机制进行了研究。结果表明rIMPDH可以与Lp(a)和重组KIV10(rKIV10)的LBS发生特异性结合,而且一定浓度的赖氨酸类似物6-氨基己酸(EACA)可以抑制这种结合,表明Apo(a)中的LBS参与了相互作用,然而本研究并未发现Lp(a)或rKIV10对rIMPDH与Plg的相互作用有明显的抑制。关键词：金黄色葡萄球菌；纤溶酶原；次黄嘌呤单核苷酸脱氢酶；赖氨酸结合位点；脂蛋白(a)TheInteractionBetweenLipoprotein(a)andRecombinantIno
5、sine5'-monophosphateDehydrogenasederivedfromStaphylococcusaureusAbstractPlasminogenreceptorsonthesurfaceofStaphylococcusaureu(S.aureus)canbindtoPlasminogen(Plg),inaddition,Plgcanbeconvertedtoplasmin(Pm)byPlgactivators.Thesurface-associatedPmenhanceS.aureustospreada
6、crossthehosttissuebarrier.Inosine5'-monophosphatedehydrogenase(IMPDH),whichisoneofPlgreceptorsonthesurfaceofS.aureus,canbindtolysinebindingsites(LBS)inplasminogen.Apolipoprotein(a)[Apo(a)],whichisonecomponentofLipoprotein(a)[Lp(a)],hasahighhomologywithPlgandbothoft
7、hemcontainLBSintheirKringle(K)domains.ThehighaffinityLBSwasidentifiedinKIV10ofApo(a).Therefore,wepreviouslyreportedthatLp(a)boundtoα-enolase,oneofPlgreceptorsonthesurfaceofS.aureus,subsequentlycompetitivelyinhibitingtheinteractionofS.aureuswithPlg.Inthisstudy,theIM
8、PDHgeneofS.aureusCMCC26003wasclonedintopASK-IBA37andtherecombinantIMPDH(rIMPDH)wasexpressedinE.coliBL21.TheinteractionbetweenrIMPDHandLp(a)wasinv
