重组A群链球菌三磷酸甘油醛脱氢酶与脂蛋白(a)的相互作用.pdf

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1、分类号Q513+.5学校代码10129UDC579学号08201083重组A群链球菌三磷酸甘油醛脱氢酶与脂蛋白(a)的相互作用TheInteractionBetweenLipoprotein(a)andRecombinantGlyceraldehyde-3-phosphateDehydrogenasederivedfromGroupAStreptococcus申请人：代霄燕学科门类：农学学科专业：预防兽医学研究方向：兽医微生物学与免疫学指导教师：韩润林教授论文提交日期：二〇一一年四月摘要三磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)是A群链

2、球菌(groupAStreptococcus,GAS)表面的纤溶酶原(Plg)受体之一，其C末端的赖氨酸残基可以与Plg的赖氨酸结合位点(LBS)相结合。脂蛋白(a)[Lp(a)]中的载脂蛋白(a)[Apo(a)]与Plg有很高的同源性，也含有LBS，因此本实验室提出了Lp(a)可能与GAS表面的Plg受体相结合，进而可能竞争性抑制GAS与Plg结合的假说。而且本实验室已经证明了GAS表面的烯醇化酶能够与Lp(a)发生特异性结合。为了更进一步探索Lp(a)是否与其它的GAS表面Plg受体结合，本研究克隆了GAS的GAPDH及其

3、C末端敲除赖氨酸残基的突变体GAPDHΔ345基因，酶切后将其连接到表达载体pASK-IBA37中，并在大肠杆菌BL-21中表达了这两个重组蛋白(rGAPDH和rGAPDHΔ345)。通过酶联免疫吸附试验(ELISA)对rGAPDH和rGAPDHΔ345与Lp(a)的相互作用机制进行了研究。结果表明rGAPDHΔ345与Lp(a)的结合值比rGAPDH显著降低，而且一定浓度的赖氨酸类似物6-氨基己酸(EACA)可以抑制这种结合，说明rGAPDH及rGAPDHΔ345与Lp(a)通过LBS发生特异性结合。另外，Lp(a)对rGA

4、PDH与Plg的相互作用也有明显的抑制。关键词：三磷酸甘油醛脱氢酶；A群链球菌；纤溶酶原；脂蛋白(a)；赖氨酸结合位点TheInteractionBetweenLipoprotein(a)andRecombinantGlyceraldehyde-3-phosphateDehydrogenasederivedfromGroupAStreptococcusAbstractGlyceraldehyde-3-phosphatedehydrogenase(GAPDH)isoneofplasminogen(Plg)receptorsont

5、hesurfaceofgroupAstreptococcus(GAS).Plgthroughitslysinebindingsites(LBS)bindstoGAPDH.Apolipoprotein(a)[Apo(a)],whichisonecomponentofLipoprotein(a)[Lp(a)],hasahighhomologywithPlg.Therefore,wepreviouslypostulatedthatLp(a)mightbindtoPlgreceptoronthesurfaceofGAS,subsequ

6、entlycompetitivelyinhibitingtheinteractionbetweenGASandPlg.Moreover,thishypothesiswasdemonstratedbyStreptococcalsurfaceenolase-Lp(a)interactionassayinourlab.Tofurthertestourhypothesis,theGAPDHgeneanditsC-terminallysineresidues-truncatedfragmentvariantofGASwasclonedi

7、ntopASK-IBA37respectively,andtherecombinantGAPDH(rGAPDH)andGAPDHΔ345(rGAPDHΔ345)wereexpressedinE.coliBL21.TheinteractionbetweenrGAPDHorrGAPDHΔ345andLp(a)wasinvestigatedbyenzyme-linkedimmunosorbentassay(ELISA).TheresultsindicatedthatthebindingofrGAPDHΔ345toLp(a)issig

8、nificantlylowerthanthatofrGAPDH.ItindicatedthatLp(a)viaitsLBSinApo(a)boundtorGAPDHandrGAPDHΔ345sinceEACA,alysineanalog,dramaticallyinhibit