性激素对奶牛输卵管上皮细胞前列腺素受体表达的调控作用.pdf

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1、分类号S828学校代码10129UDC615学号08201062性激素对奶牛输卵管上皮细胞前列腺素受体表达的调控作用RegulationofSexualHormoneontheProstanoidReceptorsExpressioninBovineOviductalEpithelialCells申请人：付改玲学科门类：农学学科专业：基础兽医学研究方向：兽医药理学指导教师：曹金山教授论文提交日期：二○一一年五月摘要目的：为进一步研究奶牛输卵管中前列腺素类化合物及其受体的生殖生理作用提供可靠的实验依

2、据和理论基础，本文分析研究了奶牛输卵管上皮细胞前列腺素受体种类及性激素（雌激素和孕酮）对这些受体表达的调控作用。方法：1）应用体外细胞培养技术培养奶牛输卵管上皮细胞。2）分别用不同浓度-9-5（10～10mol/L）的前列腺素类化合物（PGE2、PGD2、butaprost）作用于第三代传代输卵管上皮细胞，然后应用Elisa技术检测奶牛输卵管上皮细胞中第二信使cAMP-12-8含量的变化。3）分别用不同浓度（10～10mol/L）雌激素和孕激素，按4h和24h作用传代的第三代输卵管上皮细胞，应用实

3、时荧光定量RT-PCR技术检测奶牛输卵管上皮细胞中前列腺素类受体的种类及其mRNA表达的变化。4）雌激素受体阻断剂和孕激素受体阻断剂分别与相应的受体激素共同作用于细胞，通过荧光定量RT-PCR技术进一步证实性激素（E2和P4）对奶牛输卵管上皮细胞中前列腺素受体表达的调控作用。结果：首先，成功培养获得了奶牛输卵管上皮细胞的原代细胞和传代细胞，且第三代细胞生长良好，可用于上皮细胞中cAMP量和前列腺素受体mRNA表达的检测。其次，PGE2、PGD2和butaprost对上皮细胞的处理后，细胞中cAMP

4、含量发生显著的变化，且PGE2、PGD2和butaprost可浓度依存性的升高cAMP含量，证明奶牛输卵管上皮细胞中存在前列腺素受体EP2、EP4和DP受体。最后，雌激素和孕激素对奶牛输卵管上皮细胞前列腺素受体mRNA表达的调控作用的实验结果表明，奶牛输卵管上皮细胞中存在前列腺素受体EP1、EP2、EP3、EP4、FP和TP受体。此外，低浓-12度（10mol/L）的雌激素和孕激素对奶牛输卵管上皮细胞中前列腺素受体mRNA的表达具有调控作用。结论：奶牛输卵管上皮细胞中存在前列腺素受体EP1、EP2

5、、EP3、EP4、FP和TP受体。雌激素和孕激素对前列腺素类受体的表达具有调控作用，提示在奶牛输卵管上皮细胞性激素－前列腺素－前列腺素受体发挥重要的生殖生理作用。关键词：前列腺素化合物；前列腺素受体；雌激素；孕激素；输卵管上皮细胞；Elisa技术；实时荧光定量RT-PCRRegulationofSexualHormoneontheProstanoidReceptorsExpressioninBovineOviductalEpithelialCellsAbstractPurpose:Forclari

6、fythephysiologicalrolesofprostanoidanditsreceptorsinbovineoviduct,establishedthepopulationofprostanoidreceptorsandeffectsofsexualhormone(estrogensandprogesterone)onthereceptorsexpressioninbovineoviductalepithelialcellsinvitro.Methods:1)Usingthecellcul

7、tureassayraisethebovineoviductalepithelialcellsin-9-5vitro.2)Withdifferentconcentration(10～10mol/L)ofprostaglandins(PGE2,PGD2,butaprost)totreatthebovineoviductalepithelialcellsofthethirdgenerationrespectively,thendetectconcentrationofthecAMPbyElisamet

8、hod.3)Treatmentthethirdgenerantion-12-8epithelialcellswithdifferentconcentration(10～10mol/L)estrogensandprogesterone4hor24hrespectively,thencheckouttheclassofprostanoidreceptorsandtheirmRNAexpressionchangeusingtherealtimeRT-PCR.4)Usingantagoni